一种新型免疫佐剂CTA1-DD/IgG的免疫增强作用及其作用机制

肥大细胞研究的一个突破性进展是发现肥大细胞激活剂为一类新型、强效免疫佐剂。然而，许多肥大细胞激活剂是有毒性的，很难开发应用于人体免疫制剂。因此我们提出假设：可否对某些已普遍使用或有希望应用的粘膜疫苗佐剂进行改造，使其对肥大细胞激活能力增强，从而进一步增强其佐剂活性？我们前期工作选定粘膜佐剂CTA1-DD为研究对象，将其与IgG形成一种新型佐剂CTA1-DD/IgG复合物。初步实验表明，该复合物可通过激活粘膜肥大细胞而发挥进一步免疫增强效应，效果优于单独使用CTA1-DD。本研究中，我们拟用流感嗜血杆菌或流感病毒感染的小鼠模型，通过观察小鼠体内免疫反应，进一步阐明CTA1-DD/IgG的免疫增强效应；并通过FcγRIII-/-小鼠的体内肥大细胞植入实验揭示肥大细胞表面涉及该效应的受体。本研究拟提供一个瞄准肥大细胞而进行佐剂改造或设计新型佐剂的新思路，以期进一步阐明肥大细胞介导的免疫调节机制。

背景和方向.肥大细胞激活剂很可能是一种新型、有潜在应用价值的免疫佐剂。我们选择了一个粘膜佐剂CTA1-DD来探索对其改造，与IgG结合，使其对肥大细胞激活能力增强，并研究其作用机制。.主要内容.进一步用模式抗原OVA研究新型佐剂CTA1-DD/IgG的免疫调节作用；探讨CTA1-DD/IgG复合物刺激肥大细胞、激活免疫反应的机制，探索肥大细胞表面涉及该激活作用的受体；研究CTA1-DD/IgG复合物中的免疫球蛋白亚类；用微生物疫苗免疫的动物模型检测CTA1-DD/IgG的免疫调节作用。.重要结果.CTA1-DD/ IgG或CTA1-DD作为佐剂联合OVA免疫后，产生混合IgG抗体亚型，促进平衡的免疫应答。.粘膜肥大细胞MMC在T细胞激活中发挥重要作用，可能的作用机制是结合IgG免疫复合物后, 吞噬能力增加、诱导细胞凋亡、继而成为一种抗原储存库。最可能的作用受体是抑制性FcγRIIB受体。.关键数据.CTA1-DD/ IgG复合物作为佐剂联合OVA免疫后IgG2a/IgG1>1，同时产生了较高IgG2b 类抗体。与CTA1-DD佐剂组相比，脾脏的IgG抗体分泌细胞显著增加。.与仅仅加入抗原的研究组相比，IgG抗原抗体复合物组诱导产生的粘膜肥大细胞凋亡细胞达到3倍以上。而用FcγRIIB受体缺失小鼠而来的MMC并未观察到明显的凋亡现象。CTA1-DD/ IgG亦能诱导MMC凋亡。.将MMC与OVA-488/抗OVA-IgG免疫复合物孵育后（一系列浓度），与仅加入OVA-488蛋白相比，可以观察到明显的抗原摄取增加，荧光强度增高。.小鼠鼻腔组织而来的MMC和CTMC细胞摄取以抗原抗体复合物形式存在的抗原能力增强。.OVA作用后的MMC或CTMC微弱刺激抗原特异性T细胞CD69 和Ki-67的表达，而结合OVA/抗OVA免疫复合物的MMC或CTMC可较大程度刺激T细胞CD69和Ki-67的表达。.科学意义.本研究揭示了一个全新的CTA1-DD/IgG作为佐剂而增强获得性免疫反应的机制。我们在国际上首次报道粘膜肥大细胞MMC也能参与IgG免疫复合物介导的佐剂作用。我们还发现CTA1-DD/IgG佐剂可能优先增强Th1型反应，使免疫反应向更平衡的Th1/Th2方向。本研究对于粘膜疫苗及其佐剂的研发提供了新的思路。