免疫蛋白质组学方法高通量筛选梅毒螺旋体抗原标志物

现有的梅毒实验室诊断方法灵敏度和特异性低，寻找灵敏特异、能刺激机体早期产生强烈免疫应答反应的抗原标志物，是解决此问题的关键。前期我们采用不同临床阶段梅毒患者血清进行免疫蛋白质组学研究，证实了免疫蛋白质组学的方法筛选梅毒抗原标志物的可行性。本项目拟应用已建立的兔感染动物模型，采用免疫蛋白质组学和生物信息学方法高通量筛选强免疫原性的梅毒螺旋体膜蛋白；选择候选的免疫原性膜蛋白的抗原优势表位,制备抗原优势表位表达的重组蛋白；进一步制备重组蛋白的免疫兔血清，采用Western-blot技术验证重组蛋白的免疫原性和种属特异性；采用梅毒兔感染模型筛选能激发早期免疫应答反应的膜蛋白。在获得强免疫原性和种属特异性、能早期刺激机体免疫应答反应的膜蛋白后，将其优势表位基因串联，制备嵌合重组蛋白，作为新型的梅毒抗原标志物，有望提高实验诊断的灵敏度和特异性，缩短窗口期，对梅毒防治具有重要意义。

现有的梅毒实验室诊断方法存在着灵敏度、特异性低的缺陷，寻找灵敏特异的能刺激机体早期发生强烈免疫应答反应的抗原标志物，是解决此问题关键。本项目采用不同临床阶段的梅毒患者血清进行膜蛋白免疫蛋白质组学研究，验证了免疫蛋白质组学的方法筛选梅毒抗原标志物的可行性，以及机体对不同抗原的免疫应答反应时相不同。建立了兔感染动物模型，获得大量的螺旋体。采用免疫蛋白质组学和生物信息学的方法高通量筛选具有较强免疫原性的梅毒螺旋体膜蛋白；对候选的免疫原性膜蛋白的抗原优势表位进行筛选及基因克隆、表达和纯化，制备重组蛋白；共筛选了10 个具有免疫原性的蛋白（TpN15、TpN17、TpN37、TpN44.5、TpN47、TpF-1、tmp、polA、fla-A、bmp ）。进行重组蛋白的免疫血清制备和纯化，采用Western-Blot技术验证重组蛋白的免疫原性；鉴定重组蛋白的种属特异性；采用梅毒兔感染模型评价机体对重组蛋白的应答反应。最终筛选出具有强免疫原性和高种属特异性的梅毒螺旋体抗原标志物的组合（TPN15、TPN17、TPN37、TPN44.5、TPN47），建立梅毒特异性IgG抗体免疫印迹技术，该技术获得了国家发明专利和实用新型专利授权，对梅毒的防控具有重要的意义。