基于iTRAQ技术高通量筛选梅毒血清固定血清学诊断标志物

Serofast syphilis, with high prevalence but unclear pathogenesis, is difficult to manage and become one of the biggest obstacles to syphilis effective treatment. The diagnosis of SSF only can be confirmed after long and repeated test. However, the syphilis diagnosis methods available are with low susceptibility and specificity to determine its activity or invasion on cerebrospinal fluid (CSF). In our early study, comparative proteomics has been used to screen the serum diagnostic biomarkers for early syphilis (including primary and secondary syphilis), whose feasibility has been confirmed. In the current study, we first build an early syphilis cohort and follow up the cases. At the end of 12 months' follow-up, we divide the cohort into different groups according to the outcome of serum and CSF syphilis test. Proteomics based by iTRAQ is chosen to screen the serum biomarkers, then to predict its structure and its coding genes by bioinformatics. Western blot, PCR and ELISA are used to verify the predicted proteins. At last, receiver operating characteristic (ROC) curve will be used in blind to evaluate its susceptibility and specificity for SSF diagnosis. The expected results of our study will help to make a rational diagnosis of SSF, which is of great significance to scientific management of SSF.

梅毒血清固定发生率高，机制不清，尚无有效的处理措施，成为梅毒有效治疗的最大障碍。现有的梅毒诊断试验方法须长期、反复检测才能初步诊断梅毒血清固定，且对判断病情活动性、是否侵犯脑脊液的敏感性和特异性低。前期，我们采用对早期梅毒（一期、二期）患者血清进行了比较蛋白质组学研究，证实了该方法筛选梅毒血清标志物的可行性。本项目拟通过收集早期梅毒（病期<2年）病例建立队列，对患者给予正规治疗并随访12个月，随访期结束根据血清和脑脊液检测结果分为组，利用iTRAQ技术筛选血清标志物，并通过生物信息学分析，预测血清标准物的结构及编码基因，并通过Western blot、PCR、ELISA对上述预测蛋白质进行验证。最后，利用受试者工作特征曲线盲法评价SSF血清标志物诊断敏感性及特异性。本项目研究结果有望对梅毒血清固定的合理诊断及治疗具有积极的意义。

现有的梅毒诊断试验方法须长期、反复检测才能初步诊断梅毒血清固定，且对判断病情活动性、是否侵犯脑脊液的敏感性和特异性低。本项目通过收集早期梅毒（病期<2年）病例建立队列，对患者给予正规治疗并随访12个月，随访期结束根据血清和脑脊液检测结果分为组，利用iTRAQ技术筛选血清标志物，并通过生物信息学分析，预测血清标准物的结构及编码基因，并通过Western blot、PCR、ELISA对上述预测蛋白质进行验证。最后，利用受试者工作特征曲线盲法评价SSF血清标志物诊断敏感性及特异性。最终共发现89个差异蛋白点，其中两个或两个以上肽段进行定量鉴定的蛋白有72个，采用单个肽段进行定量鉴定的蛋白有12个。分别用DATA ANALYSIS 4.0软件与WARP-LC软件分析质谱数据，MASCOT搜索质谱匹配蛋白，在鉴定出的72个蛋白点中，以正常组为对照，其中有12个差异表达蛋白具有统计学意义，其中9个表达上调，3个表达下调，这12个差异蛋白的功能涉及到Tp表面蛋白、补体系统、糖蛋白等。通过扩大样本验证，TP023诊断梅毒血清固定的诊断阈值是免疫组化评分≥3，经统计分析其CRC诊断特异度为92.7%，敏感度为78.5%，阳性预测值为93.4%，阴性预测值为80.8%，在该诊断阈值下，计算收受者特征曲线（ROC）的曲线下面积（AUC）为89.4%。TP029诊断结梅毒血清固定的诊断阈值是免疫组化评分≥4，经统计分析其CRC诊断特异度为96.5%，敏感度为65.8%，阳性预测值为94.4%，阴性预测值为72.6%，在该诊断阈值下，ROC的AUC为84.2%。本项目研究结果对梅毒血清固定的合理诊断及治疗具有积极的意义。