补虚活血中药对虚中夹瘀证RP模型大鼠感光细胞凋亡相关基因表达的干预作用及机制

Both ancient and modern doctors are common shared that retinitis pigmentosa (RP) is caused by kinds of deficiency. Clinical practices and scientific researches have confirmed that blood stasis is involved in the process of RP, which the syndrome manifested deficiency and blood stasis in Chinese medicine. Deficiency supplement and blood invigoration has prominent effect on the patients suffering from the RP. Due to lacking of animal experimental data, the research on the treatment of RP in Chinese medicine is rare. The retinitis pigmentosa model rat (rdy-/-,p-/-) of royal college surgeons (RCS) with deficiency and blood stasis has been successfully established in our preliminary work. This study uses the Gouqizi(Lycium barbarum) and Danshen (Salvia miltiorrhiza) extractive act on retinitis pigmentosa model rat with deficiency and blood stasis. We aims to detecting apoptosis related genes in photoreceptor cells including death receptor signal pathway, mitochondrial signal pathway, and endoplasmic reticulum signal pathway, invesgating the intervention mechanism of the representative Chinese medicine of deficiency supplement and blood invigoration effect on RP, and providing experimental basis for the treatment of RP by the method of deficiency supplement and blood invigoration.

古今医家均认为，视网膜色素变性（Retinitsi Pigmentosa,RP）是由于“虚损”所致。临床及科学研究发现，在RP病变过程中，存在血瘀病机，为虚中夹瘀证；采用补虚活血法对虚中夹瘀证RP有较好的临床疗效。由于缺乏动物实验数据支撑，目前中医药治疗RP的实验研究很少见。本团队前期研究已经成功建立了皇家外科学院(royal college surgeons，RCS)RP虚中夹瘀证模型大鼠（rdy-/-,p-/-）。本研究采用补虚活血法的代表性药物枸杞子加丹参对虚中夹瘀证模型大鼠进行干预，检测视网膜感光细胞死亡受体信号凋亡途径、线粒体信号凋亡途径以及内质网信号凋亡途径相关基因表达，探讨补虚活血中药对“虚中夹瘀证”的干预作用及其机制，为采用补虚活血法治疗“虚中夹瘀证”RP提供实验依据。

目的：观察枸杞丹参对视网膜色素变性虚中夹瘀证动物模型视网膜组织形态及感光细胞凋亡的影响。.方法： 第一部分：本课题采用已建立的动物模型虚中夹瘀证视网膜色素变性模型大鼠 RCS （rdy-/-,p-/-）大鼠为研究对象，RCS（rdy+/+,p+/+）作为对照，分组给予枸 杞丹参灌胃，观察灌胃 28 天后 RCS 大鼠“虚中夹瘀”证候的变化，主要观察动物的一般生物学特征变化情况，检测虚证指标 cAMP、cGMP、cAMP/cGMP、PG、E2 的变化情况，以及瘀证指标 P-Selectin、血液流变学变化情况。第二部分：使用枸杞、丹参对rd10小鼠进行灌胃造模，通过检测视网膜感光细胞的参与不同凋亡途径的凋亡基因的表达包括Caspase 8、caspase-12 前体、Caspase2 成熟体以及caspase-3。并检测参与视网膜感光细胞凋亡调节αB-晶体（αB-crystallin）蛋白的表达。. 结果：第一部分，RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠杞参组灌胃28天后性激素E2、PG-E2分泌量增多，视网膜匀浆组织cAMP、cGMP、cAMP/cGMP值减少，且均与RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组差异有统计学意义。改善血瘀指标方面，RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠枸杞加丹参组灌胃28天后血瘀指标包括血浆黏度及纤维蛋白原、高切指数、P-Selectin均得到改善，与RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组差异有统计学意义。病理组织切片显示RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠杞参组灌胃28天后视网膜各层细胞、结构均有较大改善。第二部分，TUNEL染色显示枸杞丹参药物干预小鼠视网膜组织中感光细胞凋亡量低于模型组，差异有统计学意义，qPCR和WB检测表明杞参组小鼠视网膜 Caspase-8、Caspase-12、Caspase-2、Caspase-3 的mRNA和蛋白相对表达量低于模型组，αB-crystallin mRNA和蛋白相对表达量高于模型组，差异均有统计学意义。.结论：枸杞加丹参可以改善虚中夹瘀证RP动物模型肾虚病证及阴阳两虚证病症生化指标和血瘀生化指标，改善视网膜病理组织结构，减少视网膜感光细胞凋亡。