UXT通过调控FOXP3乙酰化影响调节性T细胞功能发挥的分子机制研究

The forkhead transcription factor FOXP3 is the only definitive marker of CD4+CD25+ regulatory T cells (Tregs) and has been identifed as a key regulator in the development and function of Tregs.Acetylation of FOXP3 increased both its stability and activity. In our previous study, the interaction of FOXP3 and ubiquitously-expressed transcript（UXT） was verified.Moreover,FOXP3 expression was up-regulated by UXT. UXT possesses the characteristic of mediating protein acetylation modification. Therefore，we propose that UXT may promote the acetylation of FOXP3 and influence the function of Tregs by interacting with FOXP3. To determine whether this mechanism operates in Tregs，we investigated the function of Tregs and the post-translational modification of the FOXP3 protein in UXT overexpressed or downregulated Tregs,and FOXP3 dependent molecules, the acetylation, subcellular distribution and DNA or p300 binding activity of FOXP3 were measured by ELISport，FCM，Western blot,ChIP,and CO-IP. Elucidation of the molecular mechanisms underlying UXT and FOXP3 interation will provide important insight into the understanding of FOXP3 transcription regulation.

FOXP3是CD4+CD25+调节性T细胞（Tregs）的标志性分子，是Tregs发育和维持免疫调节功能的关键分子。FOXP3乙酰化修饰显著增强其蛋白稳定性及转录调控功能。本课题组发现FOXP3与泛表达转录子（UXT）存在相互作用，并且过表达UXT可促进FOXP3的表达。已知UXT具有调节蛋白质乙酰化修饰的功能，因此我们推断UXT可能通过与FOXP3的相互作用增强了FOXP3的乙酰化水平，影响了Tregs的功能。本课题拟通过调控UXT在Tregs中的表达，采用ELISport、流式分析、Western blot、ChIP和Co-IP等技术，对FOXP3调控分子及FOXP3乙酰化、亚细胞分布、DNA结合活性、p300结合活性等进行研究，明确UXT与FOXP3的相互作用对Tregs功能的影响，阐明UXT调控FOXP3功能发挥的分子机制，为完善FOXP3的转录调控机制提供新的思路。

CD4+CD25+调节性T细胞（Tregs）是一类重要的具有免疫抑制功能的CD4+T淋巴细胞亚群，FOXP3是Tregs发育和维持免疫调节功能的关键分子。课题组前期实验通过酵母双杂交发现FOXP3与泛表达转录子（UXT）存在相互作用，但二者之间相互作用的分子机制尚未明确。为明确UXT与FOXP3的相互作用对FOXP3亚细胞分布、DNA结合活性、下游调控分子表达水平、FOXP3磷酸化、乙酰化水平及Treg功能的影响，我们进行了进一步的探讨。通过激光共聚焦和免疫共沉淀，进一步证实了CD4+CD25+Treg细胞中UXT和FOXP3共定位于细胞核，并且二者存在相互间的作用，为后续的研究奠定了理论依据。当稳定表达Flag-FOXP3 的细胞系中UXT沉默后，细胞核内的FOXP3 水平显著下降，细胞浆FOXP3 水平增加，表明UXT能影响FOXP3的亚细胞分布，促进FOXP3在细胞核内的存留稳定性。当过表达Treg 细胞中UXT后，FOXP3 与靶基因的结合能力显著增强；干扰UXT 表达后，其结合能力显著下调，表明UXT能够增强FOXP3的DNA结合活性并影响下游调控分子的表达水平。当干扰Treg细胞中UXT表达后，大大消弱了Treg对CD4+CD25-效应性T细胞及CD8+细胞毒性T细胞的抑制活性，提示UXT在Treg细胞功能的维持中起重要作用。至于二者的相互作用是否影响FOXP3的磷酸化和乙酰化水平，这部分实验仍在进行中（初步研究结果表明UXT对Jurkat 细胞中FOXP3与组蛋白乙酰转移酶p300的结合活性无明显影响）。总之，本研究结果已表明UXT是FOXP3的一个辅因子，通过调节FOXP3的亚细胞分布、DNA结合活性及下游调控分子的表达影响调节性T细胞的功能发挥。