Foxp3通过UXT负向调控NF-κB的转录活性及其复合物在调节性T细胞中的生物学意义

Foxp3主要表达于CD4+ CD25+ Tregs，是其发育和维持功能的关键分子。Foxp3可与多种转录因子如NFAT、NF-κB 和AML1/Runx1等发生直接相互作用，抑制这些转录因子的转录活性，从而维持CD4+ CD25+ Tregs的免疫负调节功能。本课题组从人外周血白细胞cDNA文库筛选了Foxp3的相互作用分子，结果发现Foxp3可与泛表达转录子UXT发生相互作用。而UXT可与NF-κB结合从而促进NF-κB的转录活性。因此细胞内可能存在Foxp3、UXT、NF-κB三者构成的复合物，或者说Foxp3可能通过与NF-κB竞争性结合UXT从而抑制NF-κB的转录活性。本课题拟采用酵母双杂交、免疫共沉淀、报告基因、慢病毒过表达及干涉等技术，明确Foxp3与UXT的相互作用位点，阐明三者的相互作用性质，并探索其相互作用对Treg功能的影响，为完善Foxp3的转录调控机制奠定基础。

Tregs是一类重要的具有免疫抑制功能的CD4+T淋巴细胞亚群，Foxp3是影响其发育与分化的关键分子，是其生物学功能发挥的重要调控因子，其调控机制尚未明。本课题组前期以Foxp3为诱饵，从人外周血白细胞cDNA文库筛选到了多个可以与其相互作用的分子。其中UXT与Foxp3在酵母细胞和哺乳动物细胞内均存在相互作用。. 本课题为明确Foxp3和UXT之间的结合区域，构建了Foxp3的5个不同长度与部位的截短体分子，证实Foxp3氨基端富含脯氨酸的区域是两种蛋白质发生结合与相互作用的关键结构域。试验证实UXT、Foxp3与NF-κB之间可以形成三元复合物，并且Foxp3和UXT都能与NF-κB下游分子A20的启动子结合，提示这可能是Foxp3和UXT通过相互作用发挥其生物学功能的一个途径。. 我们发现在人外周血Treg细胞中存在Foxp3与UXT的表达，并且共定位于细胞核内。当Treg细胞中UXT表达减少时，对自体效应性T细胞及CD8+T细胞的抑制活性得到了大幅度的削弱。提示UXT在Treg细胞功能的维持中起重要作用。在CD4+ T淋巴细胞中，UXT的异位过表达可以赋予该细胞类Treg样的抑制活性，促使免疫抑制相关的膜分子及细胞因子表达增高；且细胞对于TCR 的刺激表现出低反应性，这是Treg细胞亚群的一个重要特征。综上所述，UXT在Treg细胞的抑制活性与低反应性的诱导和维持中发挥着重要的作用，是Treg细胞功能的一个新的调控因素。. 我们进一步研究了UXT影响Treg功能的机制，发现UXT能促进Foxp3在细胞核内的存留稳定性，增强Foxp3的转录活性并促进其靶分子表达。更重要的是，UXT对Foxp3存在直接的调控作用，过表达UXT可以促进Treg、CD4+T及Jurkat细胞中内源性FOXP3的mRNA水平及蛋白质表达水平，并且这种促进作用发挥在转录水平，可以直接提高FOXP3启动子的活性。. 结肠癌患者外周血Treg细胞中Foxp3与UXT的表达都高于正常志愿者，提示UXT可能与Foxp3分子一起影响着Treg细胞的功能，在肿瘤的进展中发挥着作用。这些发现为Treg细胞及其关键分子Foxp3的调控提供了一个全新的解释，为今后更深入的分子机制研究奠定了基础。.