可分泌Arg(9)-ARF穿膜融合肽重组慢病毒对肝癌治疗作用的实验研究

肝细胞癌是严重危害人类健康的疾病，临床缺乏有效治疗手段。基因靶向治疗为肿瘤治疗提供了新方法，高效、特异的靶点是基因治疗的关键。目前肝癌治疗缺乏有效靶点。FOXM1具有调节肿瘤细胞增殖和侵袭转移的作用，且在正常组织几乎不表达。既往研究表明FOXM1是肿瘤治疗的有效靶点，且为我们前期研究证实。研究表明，Arg(9)-ARF穿膜融合肽能够有效抑制FOXM1转录活性，但其在肝癌治疗中的作用尚不清楚，且临床应用困难。本研究拟⑴采用基因嵌合和重组慢病毒表达技术构建可分泌该穿膜融合肽重组慢病毒；⑵检测其对肝癌细胞增殖和侵袭转移能力的影响；建立裸鼠皮下移植瘤模型和裸鼠皮下肝癌移植瘤肺转移模型，在体观察该重组慢病毒对肝癌生长、血管生成和转移的影响；(3)同时检测其对裸鼠的毒副作用。本研究的完成，将为该重组慢病毒在肝癌临床治疗中的应用奠定基础和提供实验依据，为探索肝癌治疗和预防肝癌复发、转移的新方法提供依据。

本研究采用基因嵌合和重组慢病毒表达技术构建可分泌该穿膜融合肽重组慢病毒，检测其对肝癌细胞增殖和侵袭转移能力的影响；建立裸鼠皮下移植瘤模型，在体观察该重组慢病毒对肝癌生长、转移的影响，同时检测其对裸鼠的毒副作用。通过上述研究分析，发现：(1)成功构建出可分泌Arg(9)-ARF穿膜融合肽重组慢病毒载体，并成功转染HepG2、Hep3B肝癌细胞株，筛选后获得稳定转染细胞系；(2)体外实验显示，ARF能够抑制肝癌细胞的增殖、侵袭能力，并能出现细胞周期阻滞和衰老诱导现象；(3)体内实验显示Arg(9)-ARF穿膜融合肽重组慢病毒能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长和转移，同时体内毒副作用实验显示其具有较低的生物毒副作用；(4)体外实验显示，ARF能下调FoxM1的生物活性，从而影响FoxM1的胞内分布并抑制其下游靶基因，但不影响FoxM1的表达水平，其肿瘤抑制功能可能和这一现象相关。