自噬与凋亡在蓝莓花青素抗口腔癌作用中的分子机制研究

The bioactivity of anthocyanins includes antioxidant, anti-inflammatory, anti-aging and so on. Our prior studies revealed blueberry anthocyanins can significantly inhibit cell proliferation of oral cancer and block the cell cycle in the G2/M period. KB cells were treated by 50,100,200μg/ml blueberry anthocyanins. The results showed that p53 was not expressed at concentration of 50μg/ml, but expressed at concentration of 100μg/ml.Activation of p53 affected much physiological activity such as cell cycle arrest,apoptosis, metabolism, differentiation and autophagy.In this study,oral cancer cells and animal model were used to explore the anti-cancer effect and mechanisms of antophagy and apoptosis induced by blueberry anthocyanins in oral cancer.It will provide certain theoretical and experimental basis for development and utilization of blueberry which is characteristic resources of Inner Mongolia and clinical application blueberry anthocyanins to prevent and treat oral cancer.

花青素具有抗氧化、抗炎及抗衰老等许多生物活性，其抗肿瘤作用研究方面近年来备受关注。课题组前期研究表明，蓝莓花青素能抑制KB细胞的增殖，阻滞细胞周期于G2/M期；用浓度为50、100、200μg/ml蓝莓花青素处理KB细胞，浓度50μg/ml时，p53不表达，当浓度达到100μg/ml时，p53开始表达。p53的活化会影响细胞周期阻滞、凋亡、代谢、分化及自噬等多种生理活性，我们选取了自噬和凋亡作为本研究的切入点，在前期工作基础上，采用动物模型和体外实验相结合的方法，从细胞、动物模型及分子水平上，观察蓝莓花青素对口腔癌细胞及裸鼠动物模型自噬和凋亡的影响，并探讨蓝莓花青素抗口腔癌作用的相关分子机制。该项目的研究将对内蒙古自治区特色资源--野生蓝莓的开发利用具有重要的意义，并为临床应用蓝莓花青素防治肿瘤及其药效学评价提供理论依据和新的治疗模式。

项目旨在研究蓝莓花青素对口腔癌KB细胞裸鼠异位移植瘤生长的抑制作用以及在自噬与凋亡方面的影响，探讨自噬与凋亡在蓝莓花青素抑制口腔癌 KB 细胞裸鼠异位移植瘤生长中的分子作用机制以及自噬与凋亡之间的关系，从而为花青素的抗癌研究提供相应依据。.研究结果表明，蓝莓花青素处理组以及加入自噬抑制剂CQ的干预组明显抑制了瘤体的生长，但处理组与干预组组间差异均不显著，低中高剂量实验组及干预组的抑瘤率分别为47.2%、46.2%、50.9%、48.4%、52.3%、45.3%。.蓝莓花青素诱导口腔癌KB细胞产生自噬。透射电镜结果显示，与阴性对照组相比，蓝莓花青素处理组中出现明显的自噬小体超微结构，且随给药浓度的增大自噬小体增多；qPCR 实验结果显示蓝莓花青素处理组LC3、Beclin1、ATG5 mRNA表达水平均高于阴性对照组且呈剂量依赖性增高，具有显著差异；Western Blot结果与qPCR结果一致，与阴性对照组相比，蓝莓花青素处理组自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达均增加，且呈一定的剂量依赖性。.蓝莓花青素诱导口腔癌KB细胞发生凋亡。Western Blot结果显示，与阴性对照组相比，蓝莓花青素处理组凋亡相关蛋白caspase-8、Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9和Bax上调, 且呈一定的剂量依赖性，Bcl-2 蛋白表达水平较阴性对照组极其显著下调，且呈剂量依赖性下降；免疫组化结果与Western Blot结果一致，蓝莓花青素处理组的caspase-8和Bcl-2表达分别高于和低于阴性对照组。.蓝莓花青素能够通过诱导自噬与凋亡抑制口腔癌KB细胞裸鼠异位移植瘤的生长，并且抑制蓝莓花青素诱导的KB 细胞自噬可能促进蓝莓花青素诱导的内源性凋亡。