miR-29c在乳腺癌Lapatinib耐药中的作用及机制研究

Lapatinib resistance is a critical issue in the treatment of HER-2 positive breast cancer. It is still unclear whether miRNA plays a role in lapatinib resistance. This project is to use qRT-PCR to assess the differential expression of miR-29c in lapatinib-resistant and lapatinib-sensitive breast cancer cell lines. We are going to evaluate its function by regulating its expression level. We are going to perform in vivo study by establishing animal models. In situ injection or tail-vein injection techinque will be used for delivery of miR-29c, with Her2-ScFv-protamine peptide fusion protein as a delivery vector. In addition, we will investigate the target gene/protein of miR-29c and its detailed pathway that is involved in regulating the lapatinib resistance. Our project is to provide new insight into the lapatinib resistance mechanism in HER-2 positive breast cancer and to explore the clinical significance of using miR-29c as a therapy.

HER-2阳性乳腺癌的Lapatinib耐药是一个重要的临床问题。关于miRNA是否在其中发挥作用目前仍不清楚。本研究拟通过qRT-PCR技术分析Lapatinib耐药细胞株与亲本细胞株之间差异表达的miR-29c。通过调节miR-29c的表达水平观察其在HER-2阳性乳腺癌细胞Lapatinib耐药中的作用。通过建立荷瘤小鼠模型采用原位注射以及尾静脉注射方法，以HER-2单链片段融合鱼精蛋白为载体，在体内进一步验证miR-29c的作用及其作为治疗药物的临床价值。此外，我们还将分析miR-29c引起Lapatinib耐药的靶基因蛋白和分子通路，以及引起miR-29c差异表达的分子机制。本项目将为克服HER2阳性乳腺癌Lapatinib耐药提供新思路，并初步探索miR-29c的临床应用价值。

miRNA是否参与HER-2阳性乳腺癌的Lapatinib耐药是一个重要的科学问题。本研究建立了HER-2阳性乳腺癌细胞Lapatinib耐药株rBT474/rSKBR3，并通过qRT-PCR技术等分析Lapatinib耐药细胞株与亲本细胞株之间差异表达的miRNA，筛选并获得了关键的miRNA: mi-29c。本研究通过在细胞学层面，采用过表达和基因沉默等技术对mi-29c表达水平进行调节，发现其可以影响HER2阳性乳腺癌细胞的Lapatinib耐药性。通过生物信息学预测我们猜miR-29c可调控ABCE1，采用双荧光素酶实验我们证实miR-29c可直接调控ABCE1的表达水平。通过CCK8检测，平板克隆实验以及流式细胞仪检测我们发现ABCE1可以影响细胞的增殖和凋亡，进而调节Lapatinib的耐药性。我们通过采用Rescue实验设计进一步证实ABCE1的表达水平的改变可以逆转miR-29c的作用，进一步证实了其在miR-29c下游并参与耐药性调控这一过程。初步动物实验证实Lapatinib作用下miR-29c和ABCE1的表达均可能参与了其耐药性的发生。研究提出了一种HER2阳性乳腺癌Lapatinib耐药的新机制，为克服HER2阳性乳腺癌Lapatinib耐药提供新思路。