弓形虫反求遗传学技术平台的建立及其对速殖子与缓殖子相互转化的基因调节分析

弓形虫是一种重要的机会性致病原虫，其机会性致病的生物学基础是速殖子与缓殖子的相互转化，目前转化的分子机制尚不清楚。本研究拟采用Transgenesis和RNAi的方法和原理，建立弓形虫Reverse Genetics技术平台：构建可稳定遗传并具有筛选标志（速殖子期特异启动子驱动的绿色荧光蛋白）和可调控的RNAi功能（热休克蛋白启动子驱动的颠倒重复靶基因序列）的转移载体，用重组载体转化培养的弓形虫并利用筛选标志克隆纯化含有靶基因的速殖子；利用热诱导启动速殖子向缓殖子的转化并同时驱动对靶基因的RNAi作用；对热诱导转化弓形虫进行免疫荧光染色（用抗缓殖子期特异性抗原的单抗标记红色的荧光抗体，以检测缓殖子），根据弓形虫的显色情况，判断速殖子向缓殖子的转化状态，并进一步推断目标基因对转化过程的影响，以阐明其在速殖子向缓殖子转化过程中的功能和作用。同理，可以研究缓殖子向速殖子转化过程的分子调节机制。