缝隙连接蛋白26在老年性耳聋中的表达及其甲基化作用机制研究

Connexin 26 (Cx26), one of the major protein subunits forming gap junctions, is important in maintaining homeostasis in the inner ear and normal hearing. Recent research presented that the expression of Cx26 decreased in mimetic inner ears, and the DNA methylation status of Cx26 gene was higher than control group. However, it's not clear how Cx26 contributes to age-related hearing loss (AHL). In this research, we aim to study the relationship between the expresstion of Cx26 and its DNA methyation in the inner ear of the mimetic aging rat model. Furthermore, we target interfering Cx26 expression by RNA interfering technology and gene transfection to discuss the effects of Cx26 to oxidative stress products and mitochondrial dysfunction in vivo. The study aims to explore the potential mechanisms of Cx26 on aging, which is profitable for us to have more knowledge of AHL.

缝隙连接蛋白26在维持内耳稳态及正常听力中发挥着重要作用，近期研究发现拟老化大鼠内耳中Cx26甲基化率升高而其表达水平降低，然而其在老年性耳聋中的机制尚不明确。本课题在通过拟老化大鼠模型在体水平探索拟老化大鼠内耳中Cx26的表达是否依赖于Cx26基因启动子区域甲基化程度，并通过RNA干扰及腺病毒载体基因转染技术对Cx26在耳蜗内的表达进行调控，进一步动态分析该生物作用是否影响细胞内氧化应激产物的改变从而加速线粒体损伤，以期阐明Cx26参与内耳老化及其可能调节机制，为明确AHL发病机制提供新的思路。

老年性耳聋是老年人中最为常见的感觉神经系统疾病，是由多因素影响并伴随着年龄相关性退化的复杂性疾病。然而，老年性耳聋的相关发病机制仍不明确。前期研究结果提示老年性耳聋与缝隙连接蛋白26启动子的甲基化程度相关，表明老年性耳聋发生发展过程中可能存在表观遗传学调控。本研究探索了拟老化内耳中Cx26的表达是否依赖于Cx26基因启动子区域甲基化程度，该生物作用是否影响细胞内氧化应激产物的改变从而加速线粒体损伤，进一步参与 AHL 的发生发展。首先建立 D-半乳糖诱导的拟老化大鼠模型，并给予甲基化抑制剂的干预，应用实时定量PCR、RT-PCR、Western Blot、免疫荧光以及 BSP 克隆检测法分析 DNA甲基化与 Cx26 之间的关系。进一步lncRNA测序，筛选出耳蜗中与老化相关的lncRNA，并通过 siRNA转染、RT-PCR、Western Blot、ROS/MDA/SOD 检测试剂盒、免疫荧光、免疫组化、透射电镜、自噬双荧光病毒转染等技术，分析 lncRNA-EPHB1对内耳细胞老化以及调控机制，以期阐明lncRNA在老化过程中的调控网络，开展本课题有利于我们进一步对 AHL 是否存在表观遗传学调控有新的认识，为明确 AHL 致病机理及进一步研究治疗方法提供理论依据。