基于抑制新靶点FLT3表达的巴豆苷选择性抗急性髓性白血病的作用机制研究

FLT3 is one of the most promising new targets for acute myeloid leukemia(AML) therapies. Our research preliminarily found that crotonoside, a high level ingredient that present in Chinese medicine croton tiglium, can selectively inhibit AML cell line MV4-11, and won’t have toxicity to the development of zebrafish in animal test. Further studies indicate that crotonoside can inhibit the expression of FLT3 mutant protein in MV4-11 cells. Based on these, our research project will mainly focus on the following three aspects inorder to understand the mechanism of these effects: 1>The effect of crotonoside for the inhibition activity of FLT3 downstream signal (e.g. MAPK, STAT5 etc) in AML cells. 2>The signal regulation mechanism behind the selective ingibition of FLT3 expression by crotonoside based on analysis of transcription factor activity, two-dimensional electrophoresis and epigenetic analysis. 3>Establishment of MV4-11 subcutaneous and in situ xenograft model to study the the in vivo efficacy and mechanism of Crotonoside. Hopefully these researches will provide theoretical support for the further development of croton and enlighten noval methods toward the targeted therapeutics of AML.

FLT3是当前最具潜力的急性髓性白血病(AML)治疗新靶点之一。本课题前期研究发现，中药巴豆中高含量成分巴豆苷对急性髓性白血病细胞MV4-11具有很好的选择性抑制活性，并在高剂量下不会对实验动物斑马鱼的发育生长产生毒性作用。进一步研究证明，巴豆苷能够抑制MV4-11细胞内特异突变蛋白FLT3的表达，以此为切入点，为探明巴豆苷产生上述作用的内在机制，本课题重点开展以下三个方面研究：1）巴豆苷对急性髓性白血病细胞内FLT3下游信号蛋白（如MAPK、STAT5等）活性的影响。2）基于转录因子活性分析、双向电泳和表观遗传分析，揭示巴豆苷抑制FLT3表达的内在信号调控机制，3）构建MV4-11皮下和原位移植瘤模型进行巴豆苷的体内药效和作用机制研究。以期为巴豆的深度开发提供理论依据和AML的靶向治疗提供新思路。

FLT3是当前最具潜力的急性髓性白血病(AML)治疗新靶点之一。本课题前期研究发现，中药巴豆中高含量成分巴豆苷对急性髓性白血病细胞MV4-11具有很好的选择性抑制活性，并在高剂量下不会对实验动物斑马鱼的发育生长产生毒性作用。进一步研究证明，巴豆苷能够抑制MV4-11细胞内特异突变蛋白FLT3的表达，以此为切入点，为探明巴豆苷产生上述作用的内在机制，本课题针对该药物开展了多重抗肿瘤药理学研究。结果证明，巴豆苷在短时间（7h）内能够有效抑制FLT3及其下游MAPK、Akt、STAT5等信号蛋白的磷酸化，而在作用时间超过20h后，会显著抑制FLT3的表达。经过进一步对转录因子和表观遗传靶标的实验分析证明，巴豆苷抑制FLT3表达是因为抑制了HDAC3和HDAC6相关信号通路，并首次证明HDAC3抑制剂可以抑制FLT3蛋白的表达，同时HDAC6在FLT3抑制剂耐药中具有一定的促进作用，为AML的靶向治疗提供了新思路。同时证明，巴豆苷同时抑制FLT3和HDAC3/6相关信号通路可以达到快速杀死肿瘤细胞的作用，达到了较好的抑制后效应，显示出比现有FLT3抑制剂更高效的抗AML作用。体内实验还证明，巴豆苷在35和70 mg/kg剂量下可以有效抑制体内AML细胞的增长，并具有毒性低和动物耐受性好的特点。另外，本课题组还在其他中药成分抗肿瘤方面开展了相关研究，并获得了一定的成果。总之，本课题为AML的靶向治疗提供新思路和候选药物，研究成果具有较高的应用价值和学术价值