基于宫内节育器避孕大鼠无创建模评价的祛瘀清热、止血调经法调控子宫血管重塑机制的研究

本课题在前期建立无创法宫内节育器(IUD)避孕大鼠模型基础上，参照临床指标，观察模型大鼠体态行为，检测阴道分泌物、IUD放置成功率/脱落率和避孕率、宫腹腔冲洗液生化物质及子宫组织酶学指标，首次提供较成熟的IUD出血副反应研究动物模型；基于此，突破以"子宫内膜"为中心的传统研究框架，引入血管重塑研究，宫宁颗粒干预后，计量子宫血管形态，激光扫描共聚焦显微镜复原血管三维形态学构筑，扫描电镜观察血管平滑肌细胞(VSMC)超微结构，免疫组化检测VSMC表型标志物α-SM-肌动蛋白、增殖细胞核抗原和增值率，免疫组化和原位杂交法检测Bcl-2/Bax及其mRNA、Fas/Fas配体及其mRNA、Caspases3、Caspases9，明确宫宁颗粒调控子宫血管重塑的机制，提供祛瘀清热、止血调经法防治IUD出血副反应的生物学依据，丰富中医妇科学"胞宫定时藏泻，为行月经之所"的理论认识和"瘀热互结"病机内涵。

本研究基于前期已建立的大鼠无创法放置宫内节育器（IUD），通过检测模型大鼠的体态行为，阴道分泌物，IUD放置成功率/脱落率和避孕率，子宫形态改变，宫腔冲洗液TXB2、6-keto-PGF1α、t-PA，腹腔冲洗液TNF-α、TGF-β、ICAM-1及子宫组织AKP、CA指标，评价造模效果；借助该动物模型，开展IUD出血副反应的血管重塑及宫宁颗粒作用机制研究，计量IUD压迫区的子宫血管形态，观察血管平滑肌细胞（VSMC）超微结构，检测VSMC表型标志物α-SM-action、PCNA和增值率，VSMC凋亡指标Bcl-2/Bax及其mRNA、Fas/FasL及其mRNA、Caspases3、Caspases9、P53、c-Myc的表达。无创法与开腹法造模的IUD放置成功率、脱落率和避孕率，差异无统计学意义；IUD避孕大鼠无创法造模后的一般状态恢复较快，旷场试验的早期行为学指标，子宫充血水肿及腹腔粘连评分，宫腔冲洗液TXB2、6-keto-PGF1α、t-PA，腹腔冲洗液TNF-α、TGF-β浓度，更接近于正常对照组，与开腹法比较，差异有统计学意义。在宫宁颗粒调控IUD避孕大鼠子宫血管结构功能方面，宫宁颗粒干预后内膜上皮和腺体形态改善、血管扩张减少，微血管分布密度、平均横截面积明显低于消炎痛干预大鼠，差异有统计学意义；超微结构观察提示，正常大鼠子宫VSMC呈收缩类型，模型组呈合成类型，接受干预后，宫宁颗粒更能显著降低子宫VSMC的PCNA、PCNA/α-SM-action、Bcl-2及其mRNA、Bcl-2/Bax表达，升高α-SM-action、Bax及其mRNA、Fas/FasL及其mRNA、Caspases3、Caspases9、P53、c-Myc表达，差异有统计学意义。本研究提示IUD避孕大鼠无创法造模，是更适宜IUD出血副反应防治研究的动物模型；祛瘀清热、止血调经法通过增加子宫VSMC收缩型比例、抑制VSMC异常增殖过程，恢复子宫血管的出凝血调控功能，可能是防治IUD出血副反应的作用机制之一。