清热解毒法对子宫内膜癌细胞自噬的分子机制研究

The endometrial carcinoma is one of the common gynecological tumors,but the molecular mechanism is not clear.Recently，many studies have found that estrogen induced non-genomic effects.Preliminary studies of mine involved in the calcium channel inhibitors and endometrial carcinoma cells autophagy processes.In addition, we also found that the principle of Clear heat and detoxication is one of the useful antitumor methods by the famous old professor Guo Zhi-qiang to control the endometrial carcinoma and the Experience side"lianhua soup"has obvious antitumor effect through our clinical research.But the mechanism and relationships between Clear heat,detoxication and cells autophagy have not yet been reported. This project intends to do research with molecular biology as follows:①First,We will detect whether the Clear heat and detoxication induced autophagy;②Second,to study the pathway between Clear heat ,detoxication and autophagy;③At last,We will study the biologic effect under the Clear heat,detoxication and autophagy in the endometrial carcinoma cells.Through the above research,it will provide research data to further explore the role of Clear heat,detoxication and autophagy ,to provide the new idea for the micro-environment of endometrial carcinoma and improve the molecular theory of endometrial carcinoma.

子宫内膜癌是妇科常见肿瘤，其发病分子机制较为复杂。近年来不断有研究证明雌激素可以诱发子宫内膜癌非基因转录效应，本人在前期研究发现作为非基因转录的钙通道抑制剂能引起子宫内膜癌细胞自噬的发生，而清热解毒法是我院名老中医郭志强教授治疗子宫内膜癌主要的方法之一，其经验方“莲花汤”通过临床观察有明显的抗癌效果，但清热解毒法对子宫内膜癌细胞自噬的作用及分子机制尚未见研究报道。本课题拟采用分子生物学方法，分三部分进行研究：①清热解毒法是否能影响子宫内膜癌细胞中自噬变化；②清热解毒法对子宫内膜癌细胞自噬的通路研究；③清热解毒法对子宫内膜癌细胞生物学效应的研究。通过以上研究，初步探讨子宫内膜癌中清热解毒法对细胞自噬的作用，为子宫内膜癌发病微环境的分子机制提供新的思路，为进一步完善子宫内膜癌发病机制提供资料。

子宫内膜癌是女性常见的三大恶性肿瘤之一，其发病机制较为复杂，而细胞自噬被看作是细胞通过消化自身的组分来适应外界刺激并维持细胞营养的本能反应，既能促进肿瘤细胞生长又能抑制肿瘤细胞死亡，呈现两种不同的作用。清热解毒方是本院老专家郭志强教授的自拟方在临床运用广泛，但至今缺少研究肿瘤细胞抑制的分子机制，故本文通过探讨清热解毒方不同方式提取（正丁醇和水提取物）和单体黄连有效成份小檗碱后作用于子宫内膜癌细胞系HEC-1A和Ishikawa的自噬作用及机制。.与阴性对照组相比，正丁醇组12h HEC-1A中LC3mRNA升高但24h下降，而LC3蛋白在12h和24h均下降，水提组则正好相反，雷帕霉素组LC3表达均下降，同时中药复方醇提和水提取物组AKT／mTOR通路均不同程度表达增加(p<0.05)；而在Ishikawa中，与阴性对照组比较，三组处理后LC3mRNA表达在12h增加，除雷帕霉素组其余两组24h下降，AKT／mTOR双表达醇提组12h、水提组24h、雷帕霉素组与正常对照组比较,差异均有统计学意义(p<0.05)。小檗碱可显著抑制HEC-1A细胞生长，在100ug/ml、50ug/ml、25ug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml浓度范围内呈剂量依赖性（P＜0.05＝。小檗碱能明显改变细胞形态，抑制子宫内膜癌Hec-1A细胞体外迁移的能力，50ug/ml效果更佳。小檗碱12.5ug/ml低剂量组可以将HEC-1A细胞阻滞于G0/G1期。小檗碱作用24h能提高HEC-1A细胞总凋亡率、早期凋亡率及晚期凋亡率，早期凋亡率更明显。结论：在HEC-1A中，连花汤正丁醇提取物与雷帕霉素作用类似,可能激活AKT／mTOR通路抑制细胞自噬；而在Ishikawa细胞中连花汤正丁醇组与水提组均通过激活AKT／mTOR通路自噬先增加后抑制，与雷帕霉素作用后自噬均增加不同。小檗碱能够抑制HCE-1A细胞株增殖、迁移，并且促进HEC-1A细胞凋亡，低剂量小檗碱能将细胞阻滞在G0/G1期。本课题的科学意义在于初步研究了清热解毒方对子宫内膜癌细胞自噬的分子机制，证实了中药复方通过AKT/mTOR通路对子宫内膜癌细胞有抑制作用，为下一步子宫内膜癌中医药治疗研究奠定了基础。