RANKL/OPG介导内膜癌上皮细胞间质化及孕激素的逆转机制

已知雌激素受体下游的协同因子分别介导他莫西芬对子宫内膜的致癌和对乳腺的抑癌作用；孕激素受体下游的RANKL（核因子κB受体活化因子配体）可介导甲羟孕酮（MPA）诱发乳腺癌，那么RANKL/OPG（与RANKL的受体RANK竞争结合）如何调节MPA对内膜癌的作用及机制亟需研究。首先分析RANKL/OPG等在人子宫内膜癌和乳腺癌的差异表达，及其与上皮细胞间质化（EMT）的相关性；原代培养内膜癌细胞并与成骨细胞系（分泌OPG）共培养，分析RANKL/OPG介导二者间的相互作用。分别构建RANK-Fluc（荧光素酶）共表达和孕激素受体A沉寂表达的内膜癌细胞系，并建立人内膜癌的裸鼠宫腔原位移植模型，体内、外分析RANKL/OPG介导MPA对内膜癌细胞生物学行为和EMT信号途径的调节，及其在内膜癌发展和转移中的作用。该研究有望明确内膜癌对孕激素治疗和耐药的分子机制，以及内膜癌发生与骨代谢间的分子联系。

子宫内膜癌（endometrial cancer, EC）是女性生殖系统最常见的三大恶性肿瘤之一。由于疗效的不确切性、耐药性等，使孕激素的临床应用受到限制。雌孕激素联合治疗（HRT）可明显增加乳腺密度，提高患乳腺癌的风险和复发率。有证据表明：孕激素能够促进乳腺癌的进展主要是由于细胞核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand, RANKL）的促增殖作用。RANKL结合乳腺上皮细胞上的细胞核因子κB受体活化因子（receptor activator of NF-κB, RANK）受体，促进了细胞周期的进展并保护细胞免受DNA损伤造成的细胞凋亡，进而促进乳腺细胞增生。鉴于孕激素诱导乳腺上皮细胞RANKL表达，促进乳腺癌的早期发生和晚期转移，而大量临床证据显示孕激素对子宫内膜癌具有药物保护作用。同为激素依懒性肿瘤的乳腺癌和子宫内膜癌，孕激素和RANK/RANKL系统在子宫内膜癌的进展和治疗方面具有怎样的交互作用呢？故本研究主要探讨RANK/RANKL系统在孕激素治疗子宫内膜癌中的作用及相关机制。主要研究内容：RANKL/RANK是否介导了内膜癌上皮细胞的EMT及其信号途径；RANKL/RANK是否调节孕激素的耐药性，以及孕激素能否抑制或逆转内膜癌EMT及其作用机制。重要结果：1. RANKL能够诱导内膜癌Ishikawa及KLE细胞发生趋化迁移。2. PRB介导MPA通过调控MAPK通路（ERK1/2, JNK）影响了RANKL诱导的内膜癌Ishikawa及KLE细胞的迁移能力。3. RANK高表达与内膜癌患者预后不良相关。4. MPA通过下调β-catenin/Snail蛋白表达水平抑制了RANKL诱导人内膜癌原位异种移植瘤的转移。RANKL处理内膜癌细胞，N-cadherin、Vimentin表达上调，而上皮性标志物E-cadherin表达下调。5. 在体内及体外，RANK/RANKL促进了CCL20的表达和分泌。6. RANKL可能是一个潜在的内膜癌靶向治疗目标。意义：该研究有望明确内膜癌对孕激素治疗和耐药的分子靶点，这对于避免激素替代治疗的副作用，指导早期子宫内膜癌患者保留生殖或内分泌功能的治疗，以及有以及有效评估子宫内膜癌的进展和预后均具有重要的临床价值。