青蒿琥酯干预下TRAF6、Foxp3在大鼠佐剂性关节炎滑膜细胞中表达的影响

类风湿关节炎（RA）是一种以关节病变为主的自身免疫性疾病, 关节的慢性炎症、滑膜增生和全身免疫反应异常为其特点。青蒿琥酯除抗疟作用外,还具有广泛的生物学作用, 如诱导细胞凋亡、抗炎和免疫调节作用。我们既往研究发现青蒿琥酯除能通过调节NF-κB 信号途径抑制LPS 诱导的RA滑膜细胞分泌TNF-α外，还可通过抑制IL-17分泌及与TNF-α两者的协同作用而抑制RA滑膜细胞分泌炎症因子。但目前尚未见有相关研究阐明其是否可抑制T、B淋巴细胞的信号通路活化而达到免疫调节作用。本课题拟通过建立佐剂性关节炎大鼠模型、原代滑膜细胞培养，观察青蒿琥酯干预下滑膜组织中Treg细胞Foxp3及B淋巴细胞TRAF6的表达，探讨青蒿琥酯对Foxp3及TRAF6相关信号通路活化的调控作用；研究青蒿琥酯对免疫细胞亚群、炎性细胞因子、滑膜细胞凋亡的影响，为青蒿琥酯治疗RA提供实验依据。

类风湿关节炎是一种以关节病变为主的自身免疫性疾病, 关节的慢性炎症、滑膜增生和全身免疫反应异常是其特点。我们已经证实青蒿琥酯具有抗炎和免疫调节作用。但目前尚未阐明其免疫调节作用的具体作用机制。本课题拟通过检测不同剂量青蒿琥酯干预组和对照组大鼠关节滑膜中免疫细胞亚群和炎性细胞因子的表达，了解不同剂量青蒿琥酯干预对Th17与Treg细胞亚群在脾细胞中表达的影响、TRAF6、Foxp3在大鼠CIA滑膜细胞中的基因表达及蛋白表达。探讨青蒿琥酯对免疫细胞亚群和炎性细胞因子的表达是否有影响，其对CIA脾细胞中T、B细胞亚群及细胞凋亡有无影响，对T淋巴细胞影响为主还是以B淋巴细胞为主。分析青蒿琥酯是通过调控T淋巴细胞信号通路Foxp3的表达还是调控B淋巴细胞信号通路TRAF6的表达而达到免疫调节作用，抑或同时通过抑制T、B淋巴细胞的信号通路活化而达到免疫调节作用。本课题实施中，我们成功进行了CIA大鼠的构建。CIA大鼠脾淋巴细胞Th17细胞亚群增多，Treg细胞亚群减少，在踝关节滑膜组织中IL-17表达上升，Foxp3表达降低，存在Th17与Treg细胞之间的失衡。青蒿琥酯明显改善CIA大鼠的关节炎指数、踝关节肿胀度，并调节Th17/Treg细胞的平衡，其能明显降低CIA大鼠体内淋巴细胞中Th17亚群的比例，同时增加Treg亚群的比例，逆转Th17/Treg的失衡。青蒿琥酯干预后可上调大鼠滑膜组织中Foxp3的表达并下调IL-17的表达。青蒿琥酯能明显抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增生，青蒿琥酯作用于滑膜细胞随着剂量增加至20ng/ml浓度其抑制作用明显，呈剂量依赖性。经过青蒿琥酯的干预，其可上调大鼠滑膜细胞Foxp3及下调TRAF6的基因表达。同时其可上调大鼠滑膜细胞Foxp3及下调TRAF6的蛋白表达呈显著性增高。青蒿琥酯抑制IL-17、TNF-α、MMP3及炎性因子的主要机制可能是通过上调控Foxp3及下调TRAF6的基因及蛋白表达，起到免疫调节作用。我们予同样剂量青蒿琥酯干预人原代滑膜细胞亦得出同样结果，提示其在人类风湿关节炎治疗中可发挥同样效果。本课题证实青蒿琥酯是通过调控T淋巴细胞信号通路Foxp3的表达及调控B淋巴细胞信号通路TRAF6的表达从而抑制炎性细胞因子释放而达到治疗RA的作用，为青蒿琥酯在其用于RA临床治疗的深入研究提供理论依据。