干细胞样抗原致敏后效应T细胞过继免疫治疗恶性胶质瘤

恶性胶质瘤死亡率高，疗效差，过继免疫治疗已被证实是针对恶性肿瘤的有效治疗方法之一。我们前期工作研究发现胶质瘤干细胞样抗原（从CD133或A2B5阳性细胞获取）具有强免疫原性，其制备的树突状细胞疫苗经体内外试验证实安全有效。本研究拟分选出A2B5+胶质瘤细胞，应用A2B5+干细胞样抗原致敏树突状细胞，并进一步介导T细胞增殖，再优选出CD3+CD4+FOXP3-效应T细胞减少负性免疫调节，对恶性胶质瘤开展效应T细胞过继免疫治疗。利用小鼠胶质瘤免疫治疗模型检验该方法的安全性及疗效，同时用GFP标记T细胞进行体内示踪；检测肿瘤浸润淋巴细胞中调节性T细胞的变化；另比较A2B5阳性和A2B5阴性细胞的蛋白表达差异，探索胶质瘤免疫治疗以及免疫逃逸可能的机制。本研究期望为恶性胶质瘤过继免疫治疗提供动物试验依据，为临床应用打好基础。

胶质瘤是中枢神经系统中最常见的肿瘤，过继免疫治疗已成为继手术，放、化疗后的第四种治疗方法。通过本研究我们分别从体外试验、动物试验证实了胶质瘤干细胞样抗原（从 CD133 或 A2B5阳性细胞中获取）具有强免疫原性，并进一步完成了I/II期临床转化；同时我们还分析来肿瘤干细胞相关特性及分子学机制，并分析了荷瘤小鼠的免疫系统变化。. 我们首先在体外用Vitamin C 提高胶质瘤A2B5+细胞比率，再通过流式细术分选出 A2B5+胶质瘤细胞，应用 A2B5+干细胞样抗原致敏树突状细胞，并诱导产生胶质瘤特异性T细胞，用于治疗小鼠恶性胶质瘤模型且取得了初步的疗效。结果发现早期介入DC疫苗治疗能有效延长荷瘤小鼠生存期，DC疫苗与T细胞联合治疗同样更加有效，我们观测到了肿瘤中CD3+细胞浸润，外周血中CD4/CD8比例下降。我们检测了荷瘤小鼠不同时段的多种细胞因子如IFN、IL-4、IL-10、IL-17等以及小鼠外周血、脾、淋巴结中淋巴细胞分类及表型的变化研究中，结果发现荷瘤小鼠早期机体免疫系统改变不大，晚期呈现免疫抑制，主要表现为调节性 T 细胞增加。在胶质瘤干细胞样抗原基础上建立的树突状细胞疫苗经体外、动物试验证实有效后，我们进行了I期临床试验，证实了其安全性可行性，现在进行II期临床试验验证其有效性。. 同时我们比较了 A2B5 阳性/阴性细胞的分子学特征，发现MHC I类分子、TRP2、gp100等在A2B5 阳性细胞高表达，B7H3同样高表达于A2B5 阳性细胞，同时我们意外地发现了B7H3免疫之外的功能。此外myc在A2B5 阳性高表达，myc在肿瘤干细胞致瘤性中起到重要作用，并受组蛋白H3K4me3/H3K27me3比例的表观遗传学调控。此外我们还针对T细胞示踪问题，利用超顺磁性氧化铁（SPIO）来标记 T 细胞，通过MR检测，为将来免疫治疗的体内示踪奠定基础。. 该研究从体外试验、动物实验、I期临床试验、分子机制等各方面阐明了干细胞样抗原的作用，为胶质瘤免疫治疗提供了新思路。