Olig修饰的神经干细胞移植联合MBP活化的T细胞过继免疫治疗脊髓损伤

神经干细胞(NSCs)移植治疗脊髓损伤(SCI)是近年来的研究热点。但研究发现，移植的NSCs大多分化为星形胶质细胞，而非人们所期望的少突胶质细胞(OLs)和神经元。因此，如何使植入的NSCs尽可能多地分化为OLs和神经元是一个重要课题。我们前期的研究证明，Olig1或Olig2基因修饰可促进培养的NSCs向OLs分化和成熟；髓鞘碱性蛋白活化的T细胞（MBP-T）可以产生神经营养因子，改善SCI局部微环境，保护残留的髓鞘和神经元。因此，我们认为Olig基因修饰的NSCs移植和MBP-T细胞联合应用，可以相辅相成，更加有利于SCI的修复。本课题拟用MBP-T细胞过继免疫SCI模型大鼠，以提供神经保护；通过显微注射将表达Olig1/Olig2的NSCs移植至损伤局部；通过对移植细胞的追踪、组织学、行为学和电生理等指标观察两者联合治疗SCI的效果，为SCI的临床治疗开辟新途径并提供实验依据。

神经干细胞（NSCs）移植治疗脊髓损伤（SCI)是最近研究的热点。然而，如何促进移植的NSCs在损伤部位存活并且分化为成髓鞘的少突胶质细胞（OLs)是一个非常重要的课题。在本课题中，我们采用髓鞘碱性蛋白（MBP）活化的T细胞（MBPT）过继免疫以改善脊髓损伤局部的微环境；通过基因修饰的方法产生Olig2过表达并携带有增强的绿色荧光蛋白（EGFP）标签的NSCs（Olig2-GFP-NSCs)，以促进NSCs在移植部位更多地分化为OLs。结果表明，过继免疫的MBPT细胞能够浸润到脊髓损伤的局部，并能够产生神经营养因子，诱导局部的小胶质细胞和/或浸润的外周血单核细胞分化为M2型巨噬细胞，这种细胞能够产生IL-13，具有抗炎作用。因此，MBPT过继免疫组中移植的NSCs存活数量明显增多，大约是对照组的5倍。Olig2修饰的NSCs在移植部位分化为OLs的数量也明显增多，大约是对照组的12倍。在MBPT和Olig2-GFP-NSCs联合应用组，再髓鞘化轴突的数量较其它组也明显增多。并且，在MBPT和NSCs的联合应用组（包括Olig2修饰的NSCs和普通的NSCs）均可观察到对SCI修复有利的表现，包括如脊髓损伤空洞的减小、残留髓鞘的增多、行为学评分的提高等。这些结果表明：MBP-T细胞过继免疫能够通过改善损伤局部免疫微环境提高移植细胞的存活率；Olig2过表达也能够促进移植的NSCs向OLs分化；MBP-T细胞与NSCs联合应用在治疗SCI方面有协同作用。但是，Olig2基因修饰的NSCs与普通的NSCs比较在组织学和行为学方面并没有显示明显的优势。这表明有许多深层次的问题尚有待于进一步阐明。因此，我们对实验进展过程中发现的新问题进行了更深层面的机制探讨，包括神经前体细胞分化发育调控的精确机制、脊髓损伤后局部免疫微环境的特征和干预措施探讨等。在为期三年的研究过程中，有6名研究生和9名青年科研人员参与本课题的研究工作，参加国际会议和全国会议各一次，在中文期刊发表研究论文8篇，在SCI期刊发表论文11篇。综上所述，我们圆满完成了全部的研究计划，在取得了预期成果的基础上又提出了新的问题，为下一阶段的研究工作打下了扎实的基础。