靶向纳米载药体系的透黏膜性及抗乳腺癌作用

本课题旨在研究和揭示纳米状态下壳聚糖包裹的具有靶向性的多层脂质体的透黏膜行为，构建高效透黏膜纳米载药制剂和新纳米给药体系。拟以具有促进药物黏膜吸收功能的壳聚糖为表面材料，通过靶向设计，构建具有靶向作用的壳聚糖包裹的纳米脂质体多层体系。用体外细胞模型、离体组织模型和活体动物模型等多方位分析检测技术，研究纳米靶向体系在生物体内外与黏膜组织间的相互作用，研究界面活性基团变化对其在黏膜粘附性和黏膜通透性方面的影响规律，获得具有高效黏膜亲和性和通透性的纳米载体。用人乳腺癌细胞MCF-7建立Wistar大鼠肿瘤动物模型，研究壳聚糖纳米脂质体载体携载Herceptin和ADR模型药物的黏膜给药模式及对人乳腺癌细胞生长的抑制效果，为透黏膜药物，透黏膜免疫疫苗载体和抗肿瘤等制剂的研究和应用提供理论基础。

本课题研究和揭示了纳米状态下壳聚糖包裹的具有靶向性的多层脂质体的透黏膜行为，构建高效透黏膜纳米载药制剂和新纳米给药体系。以具有促进药物黏膜吸收功能的壳聚糖为表面材料，通过靶向设计，进行化学修饰，得到氨基葡萄糖盐酸盐修饰的具有靶向作用的壳聚糖衍生物。红外光谱检测正品氨基葡萄糖盐酸盐基团的成功引入。取代度分析表明，不同分子量的GNCS的取代度相似，证实壳聚糖分子量对所制备的GNCS的取代度影响较小。通过两性分子的自组装构建具有靶向作用的壳聚糖包裹的纳米脂质体多层体系。粒径扫描结果表明不同取代度的GNCS 纳米脂质体的平均粒径呈正态分布，分布范围较窄。Cyro-TEM观察可知， GNCS纳米脂质体为球形，形态完整。作为药物的载体具有较高的包封率与包载量且行之稳定。通过红细胞溶血实验、蛋白吸附实验和MTT检测，确定了其作为药物载体的安全性。.利用MTT比色法研究了空白GNCS纳米脂质体、载药纳米脂质体以及游离DOX、HT对人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549两种肿瘤细胞体外生长的抑制。实验结果表明，空白GNCS纳米脂质体对两种肿瘤细胞均无显著毒性；载药纳米脂质体及游离DOX、HT对两种肿瘤细胞的体外生长均表现出一定的抑制作用。随着纳米脂质体中负载药物浓度的增大和作用时间的延长，载药纳米脂质体和游离药物对肿瘤细胞生长的抑制率增大。利用荧光酶标仪与荧光显微镜，实验结果表明，细胞对GNCS纳米脂质体的摄取具有明显的时间和浓度依赖性，随着作用时间的增长和纳米脂质体浓度的增大细胞摄取量逐渐增加，且在实验选择的时间合浓度范围内细胞对纳米粒的摄取均未呈现饱和状态。以健康小鼠为模型对FITC-GNCS纳米脂质体的组织分布情况进行检测。结果表明，FITC-GNCS-11%纳米脂质体在肝脏、脾脏和肺部的分布较少，在肾脏和血液中分布较多，随着作用时间的增长，纳米脂质体在肝脏、脾脏和肺部的分布增加，在肾脏和血液中的含量降低。DOX-GNCS纳米脂质体可显著抑制S180荷瘤小鼠的实体瘤的生长，较游离DOX具有更强的抗肿瘤活性。此外，GNCS纳米脂质体对DOX的负载减少了DOX对正常组织和器官的损伤，有效降低了药物的毒性。综上所述，GNCS纳米脂质体是一种无毒、生物相容性良好且具有一定缓释功能的纳米材料，适合于用作疏水性抗肿瘤药物的载体。