多肽装载复合物各分子在抗原加工过程中的贡献权重及协同作用

The hierarchical contribution of members of peptide loading complex (plc) to MHC class I antigen processing is largely unknown. the reasons for this are due to lacking of a quantitative method for analysis of antigen processing and component-deficient cell lines used for study come with different background. In this proposal we will study MHC class I assembly, peptide loading and surface presentation on a set of component knock-out cell lines of plc made from the same background with an established quantitative assay for antigen processing. The study will provide a hierarchical importance of each member of plc in MHC class I antigen processing.

由多个蛋白质分子构成的多肽装载复合物在抗原加工与提呈过程中起重要作用，但研究这些分子的缺陷细胞系背景迥异，加上缺乏定量分析抗原加工与提呈的方法，无法为这些分子对抗原加工与提呈的贡献权重作出排名。本课题通过建立同一背景的各种分子敲除细胞系，使用本实验室建立的将抗原提呈细胞可逆穿孔导入已知浓度蛋白的抗原加工与提呈的定量分析方法，研究比较多肽装载复合物分子在抗原加工与提呈过程中的功能与作用，并期望首次获得这些分子的贡献权重与排名。

多肽装载复合物是由参与抗原加工和提呈的数个蛋白质分子组成的，其中抗原加工相关转运蛋白，TAP结合蛋白和钙网蛋白是MHC-I类内源性抗原加工和递呈途径肽组装复合体中的三个重要蛋白，在T细胞免疫应答过程中起重要作用。虽然对于肽组装复合体及其单个蛋白组分在抗原加工递呈中的作用，国内外已有大量文献报道。但是由于研究手段的缺乏，目前由于尚没有很好的将完整目抗原蛋白直接导入细胞方法，其在复合体中的相对重要性还未得到清楚和定量的分析。本项目建立了一种新型的可定量分析蛋白质抗原加工能力的方法，我们使用来自猪链球菌的溶血素将细胞可逆穿孔，将待加工抗原定量装载，使得定量分析抗原加工能力成为可能，在此基础上对参与抗原加工与提呈的各种蛋白的贡献度开展了研究，发现钙网蛋白在抗原加工与提呈过程中可能有着更广泛和重要的作用。本研究是世界上首个对MHC-I途径中不同蛋白在途径中相对重要性进行比较的研究，对MHC-I类内源性抗原加工和递呈途径的研究对于理解免疫识别、疫苗设计、病毒和肿瘤的免疫逃逸、以及阐明某些自身免疫机制是十分重要。