猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒基因表达调控序列的解析

本研究旨在界定调控猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒（PRRSV）的感染性、基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录以及翻译等病毒复制过程的非编码区（UTR）序列结构。在本室所建立的反向遗传系统的基础上，首先在两端UTR前后插入限制性酶切位点以便分离UTR并对其进行系列缺失。将这些突变体DNA或经体外转录的RNA转染细胞，检测后者所致细胞病变和病毒RNA组分的变化，以此鉴定特定缺失区的调控功能。利用化学和核酸酶法对分离的UTR RNA的二级结构进行探测，在此基础上进行点突变以确定RNA二级结构的重要性。利用双报告基因系统在试管内和转染细胞中检测5'UTR的IRES功能，并对后者的功能区进行系列缺失法定位。最后，通过突变法插入并检测不等长度的poly（A）在病毒复制过程中的调控作用。