经食道胃途径经自然腔道内镜手术（NOTES）无菌术机制研究和方法体系的建立

Effective and safe aseptic is the most basic requirement of surgery. As a new surgical approach, natural orifice transluminal endoscopic surgery (NOTES) is gradually accepted due to the advantage of minimally invasive, painless and unique advantages of access to pancreas and posterior wall of stomach. But NOTES aseptic technique is quite different with endoscopic surgery and typical surgery. The mechanism and implementation process of NOTES aseptic technique is not yet systematic studied around the world. Transgastric NOTES is one of the most commonly used approach beacause of its small bacterial load, simple pathways established, and easily be accepted by patients. As one of the first units carrying out NOTES research,we have conducted a preliminary study of NOTES aseptic technique and published SCI papers.In this study we intend to carry out systematic research on relevant factors of NOTES aseptic，including sterilization methods of surgical endoscope,bacterial culture and identification of gastric juice,concentration and duration of disinfectant in vitro sterilization,the mucousal and systemic effects of disinfectants on the animal, effectiveness of the gastric wall incision closure,simulation disinfection in gastric polypectomy patients,NOTES devices application process,bacterial culture and identification of surgical procedures.In order to identify the mechanism of aseptic in transgastric NOTES and establish a safe and effective aseptic methodology of transgastric NOTES.

有效安全的无菌术是手术的最基本要求。经自然腔道内镜手术（NOTES）具有创伤小疼痛少、胰腺胃后壁疾病建立手术通路方便快捷等优点。作为NOTES代表的经口内镜下肌切开术（POEM）近期也广泛开展,在良好治疗效果的同时也暴露了感染的风险。NOTES无菌术与内镜手术、外科手术都有极大不同，NOTES无菌术的机制及方法体系国内外尚未系统研究，如何认识和实施NOTES无菌术成为当前和未来急需解决的问题。作为国内最早开展NOTES研究的单位之一，伦理委员会批准后，在动物实验和临床应用基础上对NOTES无菌术进行了初步研究并发表了SCI论文。本课题拟对最常用的NOTES手术途径-经食管胃途径无菌术各环节相关因素进行系统研究，包括手术设备器械灭菌法、细菌种类负荷、有效安全的消毒剂筛选应用、管壁切口闭合方式，NOTES手术方法流程中的无菌术机制等，打牢基础，以期构建安全有效的NOTES无菌术方法体系。

本课题历时3年，主要完成了以下四部分内容：1.安全有效的消毒剂和合理的消毒方法的筛选；2.NOTES手术内镜灭菌方法的研究；3.NOTES操作方法和流程对无菌术的影响；4.临床应用验证NOTES无菌术的安全性和有效性。通过四部分研究取得了如下结果：1.明确了正常人体胃内菌群种类及负荷情况，并分别通过细菌培养皿方法及16s-rDNA基金检测方法明确了胃内细菌种类及占比情况，同时针对菌群分析结果筛选出合适的消毒剂：聚维酮碘和洗必泰，两者通过小鼠急性毒性试验得出结果，在血实验室结果及病理结果方面证明胃腔灌洗洗必泰或聚维酮碘对大鼠无急性毒性作用。2.明确了正确规范的内镜器械洗消操作流程和规范；3.设计了外套管、带线缝合夹以及十二指肠球部封堵气囊的专利并进行了申请，获得专利批准2项。同时进行了胃壁闭合方法的研究，通过实验猪模拟ESD操作进行切口闭合的对比研究中，新型缝合夹无论是在夹闭时间还是夹子使用数量，在闭合大切口方面均较普通金属夹组具有明显优势，具有良好的临床应用前景。4.针对前期研究结果进行了临床试验，采用胃息肉患者进行模拟消毒实验，通过对比消毒前后胃液内细菌菌种和负荷量的变化明确消毒效果，结果提示经胃腔内聚维酮碘或洗必泰溶液灌洗消毒后，胃内菌种及负荷量明显减少，灌洗消毒效果显著。上述结果对后继进一步开展NOTES的基础研究及临床研究提供了可靠的技术支持，具备切实的临床指导意义，也具有广泛应用的良好前景。本课题总体实施顺利，获得了一定的科学成果，包括SCI论文2篇，中文核心期刊论文3篇，实用新型专利2项。同时本课题也存在一些问题和难点：1.第一部分胃液抽取量最终获得结果的样本量较少，其原因是研究前期本课题组进行了大量样本的采样，但最终通过细菌培养和鉴定方法进行鉴定后胃液细菌鉴定困难，很难提取DNA，远期期望通过更多普查抽样或胃黏膜切片送检培养来获得更多的结果；2.胃腔切口闭合技术没有进行临床研究进一步验证其可行性和安全性，预计后继研究中继续进行相关临床应用方面的研究。