乳腺癌病人血清microRNA 表达谱：一种潜在的乳腺癌筛选标记

早期乳腺癌患者通常缺乏明显的临床体征，而且目前临床上尚无有效的早期辅助诊断方法，多数病例在确诊时已是中晚期，治疗效果不佳，预后较差。因此寻找乳腺癌的前期发病标志，对于乳腺癌的早期诊治及实施一级预防具有重大意义。本课题拟采用小RNA测序方法，建立乳腺癌病人肿瘤组织和血清中miRNA表达谱；并采用生物信息学分析找出关键miRNAs，通过Real-Time PCR 鉴定其有效性，进一步在乳腺肿瘤病人中验证其灵敏度和特异性，阐明乳腺癌病人血清microRNA表达谱作为潜在的乳腺癌筛选生物标志的可靠性，为今后乳腺癌的早期诊断和预后判断提供重要的基础研究资料。

早期乳腺癌患者通常缺乏明显的临床体征，而且目前临床上尚无有效的早期辅助诊断方法，多数病例在确诊时已是中晚期，治疗效果不佳，预后较差。因此寻找乳腺癌的前期发病标志，对于乳腺癌的早期诊治及实施一级预防具有重大意义。近年来，越来越多的研究表明microRNA（miRNA）能够作为癌症的生物学标志。而在血液中检出癌症特异性的miRNA并将其作为癌症的生物学标志对于早期诊断癌症则具有至关重要的意义。本课题分别建立肿瘤组织和血清miRNA表达谱，经比对分析，发现7个miRNA（miR-103, miR-23a, miR-29a, miR-222, miR-23b, miR-24 and miR-25）在乳腺肿瘤组织和乳腺癌病人血清中都发生上调改变。对候选miRNAs进行两轮筛选，首先在小样本中（50份未经放疗和化疗的原发性乳腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织），检测7个miRNAs的表达情况，发现miR-222在乳腺肿瘤组织中上调表达（P<0.05）。然后再在大样本中（未经放疗和化疗的原发性乳腺癌病人（100例）、乳腺良性肿瘤病人（乳腺纤维瘤、乳腺囊性增生病、乳腺大导管乳头状瘤、脂肪瘤，20例），卵巢癌病人（20例）和正常对照（100例）血清）验证其灵敏度和特异性。结果发现miR-222在乳腺癌病人血清中表达高于健康对照组，P=0.0032，差异有统计学意义。ROC曲线分析显示血清miR-222可以区分乳腺肿瘤病人和健康人）。而且miR-222在乳腺肿瘤病人，健康对照，乳腺良性肿瘤病人和卵巢癌病人血清中表达有明显差异（P=0.006），提示miR-222可能是潜在的乳腺肿瘤筛选标志物。同时针对前期测序结果利用生物信息学分析发现一新型miRNA，命名为miR-BS1，从二级结构，系统保守性，表达，生物功能，靶基因预测分析等方面综合验证其真实性。将不同物种miR-BS1成熟序列进行多序列比对分析，发现为第5位到第11位以及第13位到第17位碱基为保守碱基，说明miR-BS1基因在不同物种间的高度保守性。Real-Time PCR测定miR-BS1在乳腺肿瘤组织和乳腺肿瘤病人血清中的差异表达，发现miR-BS1在肿瘤组织和肿瘤病人血清中表达均下调。双荧光报告分析显示，miR-BS1可以显著抑制含KRAS 3’-UTR的报告基因活性。认为miR-BS1可能是一潜在的有功能的新miRNA。