通过LOX-1/NFκB/ABCA1途径探讨护心方影响泡沫细胞胆固醇逆转运的作用机制

在冠心病研究领域，随着他汀类药物的广泛应用，胆固醇逆向转运（RCT）已成为调脂和抗AS研究的热点。然而目前仍没有一个真正的RCT药物上市，而且有关中药特别是中药复方促进RCT研究非常少见。护心方为邓铁涛教授经验方，临床疗效显著，推测其抗AS疗效与RCT相关。本研究以气虚痰瘀证冠心病患者及其单核/巨噬细胞、THP-1细胞为研究对象，首次评价护心方对外周细胞RCT作用，明确气虚痰瘀证冠心病患者单核/巨噬细胞泡沫化特点；同时研究首次提出LOX-1/NFκB/ABCA1信号通路在RCT中的作用，并采用基因沉默及过表达技术探讨该通路对泡沫细胞RCT的调控作用，以及护心方可能的调控机制。研究将阐明护心方促进RCT作用及机制，探讨LOX-1/NFκB/ABCA1信号通路在RCT过程的调控作用，研究结果将为护心方的临床应用提供科学依据，同时，为进一步开发具有自主知识产权的新型调脂中药提供科学依据。

目的：本研究以THP-1源泡沫细胞为研究对象，评价护心方对外周细胞RCT作用；同时采用基因沉默及过表达技术探讨LOX-1/NFκB/ABCA1信号通路在RCT中的作用，以及护心方可能的调控机制。.方法：采用流式细胞仪技术及闪烁计数法测定细胞内胆固醇含量及流出率；采用蛋白质印迹法及逆转录聚合酶链反应测定LOX-1、ABCA1及LOX-1mRNA、ABCA1mRNA表达；采用基因沉默及过表达技术探讨LOX-1/NFκB/ABCA1信号通路在RCT中的作用及护心方的作用机制；临床研究方面，采用随机对照研究，观察护心方对气虚痰瘀证冠心病患者临床疗效及抗AS作用。.结果：与空白对照组相比，护心方可以抑制胆固醇摄入（P﹤0.05）、促进oxLDL介导的胆固醇流出（P﹤0.05），均呈时间依赖性；同时，护心方可抑制LOX1基因、总蛋白表达（P﹤0.05），促进ABCA1总蛋白的表达（P﹤0.05），均呈时间依赖性。在LOX-1/NFκB/ABCA1通路中，NFκB可能受多种因素调控；护心方能对LOX-1过表达和基因沉默后的NFκB的磷酸化水平产生多重影响，其在通路中的作用点可能在NFκB-ABCA1环节，其中的机制还有待证实。LOX-1过表达质粒稳定转染THP-1细胞株具有明显的富荷脂质特点，细胞株稳定；对护心方主要成分分析显示：红花黄素（HYSA）具有良好的RCT作用，与对照组比较，可显著抑制胆固醇摄入（P﹤0.01），并促进HDL3诱导的胆固醇流出（P﹤0.01），可显著减少LOX-1蛋白表达(P﹤0.01)，能直接增加ABCA1和ABCA1mRNA的表达（P﹤0.01）。临床研究部分结果显示：护心方能改善气虚痰瘀证冠心病患者血脂代谢，提高HDL-C水平（P﹤0.05）；显著改善胸痛、胸闷、心悸等症状，总有效率80.7%显著高于对照组（P﹤0.05）。.结论：护心方可促进THP-1源泡沫细胞RCT作用，可于转录水平抑制LOX-1表达、于蛋白水平促进ABCA1表达；护心方能对LOX-1过表达和基因沉默后的NFkB的磷酸化水平产生影响，其中的机制还有待证实。护心方主要成分HYSA具有良好的RCT作用；护心方对气虚痰瘀证冠心病患者HDL-C方面改善作用明显，更能显著改善患者临床症状。