mTOR通路参与柯萨奇B3病毒致病机制研究

CVB3可使感染的细胞产生直接的细胞病变效应及凋亡，并能诱导mTOR mRNA及蛋白表达，但CVB3所致细胞病变效应和凋亡是否有mTOR通路的参与尚不得而知。本课题在建立CVB3感染的Hela细胞模型后，首先以LY294002抑制PI3K，观察PI3K及其下游分子Akt、mTOR表达及磷酸化的状况，再以雷帕霉素抑制mTOR，观察mTOR及下游分子4EBP1，S6K等表达及磷酸化的变化；同时观察两种抑制剂处理后的细胞病变效应与凋亡程度、细胞内CVB3复制与释放等的变化，比较抑制PI3K和直接抑制mTOR后这些变化的差异。建立4EBP1、S6K、Akt1、Akt2的过表达细胞模型，观察CVB3感染所诱导的细胞病变效应和凋亡的变化；探索mTOR及其上下游位点分子参与调控CVB3感染细胞所产生直接的细胞病变效应及凋亡的分子机制，确定这一病变过程中的关键分子，为病毒性心肌炎的防治提供新思路。

本课题探讨mTOR通路参与柯萨奇B3病毒致病的机制。研究发现，随干预时间延长，CVB3 mRNA表达逐渐增加；CVB3感染使HeLa细胞mTOR信号通路表达下调；CVB3感染可使Hela细胞发生凋亡，并随着感染时间的延长，细胞凋亡增多，Bim、Bax、Caspase-3、caspas-9等在CVB3感染Hela细胞中发挥作用。随着感染时间的延长，PI3K抑制剂LY294002和mTOR抑制剂雷帕霉素可以促进细胞凋亡，Bim、Bax、Caspase-3、Caspase-9等基因参与作用。转染Akt1、Akt2、4EBP1、S6K基因后，CVB3使Hela细胞的凋亡减少。说明mTOR通路在CVB3感染所致凋亡过程中产生重要作用。