余甘根苷B抗柯萨奇病毒B3的分子机制研究

Coxsackie virus B3 (coxsackievirus B3, CVB3) is the most important pathogens of viral myocarditis and persistent infection can lead to acute sudden death and dilated cardiomyopathy. It has been found that CVB3 infection caused by myocardial apoptosis may be one of the most important factors which lead to viral myocarditis. Phyllaemblicin B is a new compound extracted from the roots of Phyllanthus em blica L. (Euphorbiaceae). We have demonstrated that Phyllaemblicin B has obvious anti-CVB3 activity both in vitro and in vivo. And we also have found that Phyllaemblicin B can clearly inhibit CVB3-associated apoptosis, which is one of its antiviral mechanism, but the the molecular mechanisms and targets remains unclear. Therefore, on the basis of preliminary studies, the project is through simulating Viral myocarditis model infected by CVB3 in vitro and in vivo to further explore the effect of Phyllaemblicin B on CVB3-induced apoptosis and the expression levels of key proteins in different apoptotic pathways, by using real-time PCR, Western blot, immunofluorescence and immunohistochemisty. Through this stufy, we can approach a potential therapeutic molecular targets for viral myocarditis.

柯萨奇病毒B3（coxsackievirus B3，CVB3）是病毒性心肌炎的最主要病原体，病毒持续感染可导致急性猝死及扩张型心肌病，已发现CVB3感染所导致心肌细胞凋亡可能是导致病毒性心肌炎一个重要因素。余甘根苷B是从余甘子根中提取的一个新化合物，我们已证明余甘根苷B在体外和体内水平均具有很明显的抗CVB3活性，其对CVB3感染所致的宿主细胞凋亡的抑制作用是其抗病毒作用机制之一，但其具体作用的分子机制及作用靶点仍不明确。因此，本项目在前期研究的基础上，以病毒性心肌炎的体外细胞模型和动物体内模型为研究对象，利用Real-time PCR、Western-blot、免疫荧光及免疫组化等分子细胞生物学技术，分别从体外和体内水平，进一步深入探讨余甘根苷B作用后对CVB3感染所导致的细胞凋亡情况以及对不同细胞凋亡通路中关键蛋白表达水平的影响，以期为病毒性心肌炎的治疗寻找新的分子靶点。

柯萨奇病毒B3（coxsackievirus B3，CVB3）是病毒性心肌炎的最主要病原体，病毒持续感染可导致急性猝死及扩张型心肌病，余甘根苷B是从余甘子根中提取的一个新化合物，我们已证明余甘根苷B在体外和体内水平均具有很明显的抗CVB3活性，在本研究中我们进一步验证了其抗病毒活性，发现余甘根苷B对CVB3感染的乳鼠心肌细胞有很好的保护作用；同时也对其作用机制进行进一步的探讨，发现余甘根苷B能抑制CVB3在细胞内的生物合成，并具有直接抑制CVB3的作用，其抗病毒作用可能是通过抑制病毒感染所引起的宿主细胞凋亡有关，且有可能是通过线粒体途径起作用，但还未找到具体的凋亡信号通路。同时又发现了一种新的具有较好抗CVB3活性的化合物NCC，对新化合物NCC的抗病毒活性研究发现，在体外水平和体内水平，NCC均能显著抑制CVB3对宿主细胞的感染，对病毒性心肌炎有很好的治疗作用，其作用机制和余甘根苷B相似，也是通过抑制病毒感染所引起的宿主细胞凋亡来起作用，在病毒性心肌炎的体外细胞模型和动物体内模型中，均能在基因和蛋白水平抑制凋亡相关因子caspase-3的表达，促进bcl-2的表达。新化合物NCC的发现，为我们对于治疗病毒性心肌炎的研究又提供了一个很好的候选药物，并且以此研究为基础，我们也在进行新的基金课题的申请。