新型腺相关病毒载体转导突变型CD40L基因治疗肺癌的研究

腺相关病毒载体（AAV）是目前最安全的基因治疗载体，但其在肺癌细胞中基因转导效率及靶向性均存在局限。研究已显示CD40L基因治疗在肺癌中可激活抗肿瘤免疫，具有临床应用前景，但因产生可溶性CD40L（sCD40L）可能出现全身副作用。本项目应用分子克隆、病毒载体包装及基因转导等技术，对AAV载体和目的基因CD40L进行优化。①首先在AAV1-12中遴选出对肺癌特异性最强的血清型AAV，并包装为双链AAV，进一步提高基因转导效率；②以非酶切突变型CD40L-M3为目的基因，保留CD40L的抗肿瘤免疫活性，减少sCD40L的产生；③建立新血清型双链AAV介导突变型CD40L-M3基因的肺癌治疗系统，进行体内及体外研究，观察其调节抗肿瘤免疫、抑制肺癌生长和诱导肿瘤细胞凋亡的作用，同时观察sCD40L的产生水平及相关副作用。预期在肺癌基因治疗的关键环节- - 有效性、靶向性和安全性方面有所突破。

腺相关病毒（AAV）是目前最安全的基因治疗载体，但其在肺癌细胞中的基因转导效率及靶向性存在局限。研究显示免疫基因CD40L具有直接抑制CD40+ 肿瘤、激活抗肿瘤免疫、调节肿瘤微环境等多重作用，但因其产生的潜在炎症因子，可溶性CD40L（sCD40L），可能出现全身副作用。本项目应用分子克隆、病毒载体包装及基因转导等技术，对AAV载体和目的基因CD40L进行优化，通过体内外实验研究该基因治疗体系抗肺癌作用的有效性和安全性。本项目研究发现：①AAV不同血清型AAV1-12中, AAV5对肺癌特异性最强，自身互补双链scAAV5可进一步提高转导效率；②以非酶切突变型CD40L-M为目的基因，该基因具有抑制CD40+ 肺癌细胞增殖、促其凋亡，诱导树突状细胞成熟，减少sCD40L分泌的功能；③本项目成功构建了scAAV5-CD40L-M基因治疗系统，体内外研究均证实该系统较scAAV5-CD40L表达膜型CD40L增多，具有增强的抗肺癌作用及较小的副作用；④鉴于肿瘤形成的复杂性、肿瘤和老化的交互作用，本项目初步进行了肺癌联合治疗研究，以CD40L联合具有抑癌作用的、新的抗衰老基因Klotho，实验结果提示该联合治疗具有协同抗肺癌作用；以CD40L联合新一代抗癌药长春瑞滨，结果提示CD40L增强长春瑞滨化疗敏感性。