Fasudil对内皮祖细胞移植微环境的影响及作用机制

干细胞治疗缺血性心脏病，一度成为基础和临床研究的热点，大部分实验室研究得到了令人振奋的结果；但临床实验荟萃分析却发现：干细胞治疗缺血性心脏病疗效有限。研究者认为这与干细胞移植后微环境不适合其进一步生长、分化有关。Rho激酶抑制剂fasudil能够抑制心肌纤维化，增加组织内NO浓度，解除微循环痉挛，成为改善干细胞微环境的新希望。该项目的是通过体内、体外实验观察fasudil对内皮祖细胞（EPCs）生物学性质（包括增殖、分化、迁移、血管形成等能力）的影响，及两者联合治疗对心梗大鼠心功能、血流灌注的改善，并探讨相关机制。本研究利用免疫缺陷小鼠制作心梗模型，移植Tie-2转基因小鼠的EPCs，在避免免疫排斥作用后，进一步探讨fasudil对移植EPCs归巢数量、分化方向的影响。旨在从理论和实践两方面证实fasudil可以改善移植细胞的微环境，为干细胞的临床应用提供新的思路和实验依据。

背景：干细胞治疗缺血性心脏病，一度成为基础和临床研究的热点，大部分实验室研究得到了令人振奋的结果；但临床实验荟萃分析却发现：干细胞治疗缺血性心脏病疗效有限。研究者认为这与干细胞移植后微环境不适合其进一步生长、分化有关。Rho激酶抑制剂fasudil能够抑制心肌纤维化，增加组织内NO浓度，解除微循环痉挛，成为改善干细胞微环境的新希望。方向：通过体内、体外实验观察fasudil对内皮祖细胞（EPCs）生物学性质（包括增殖、分化、迁移、血管形成等能力）的影响，及两者联合治疗对心梗大鼠心功能、血流灌注的改善，并探讨相关机制。主要内容：1、培养心肌梗死患者内皮祖细胞，检测fasudil对内皮祖细胞分化、增殖、迁移、血管形成、凋亡、及P-MYPT1蛋白表达的影响2、制作心肌梗死大鼠模型，将转绿色荧光蛋白基因小鼠的内皮祖细胞经培养后移植大鼠心肌内，检测应用fasudil后对动物心功能、心肌血流灌注、血管密度、心肌纤维化程度、NO浓度的影响。重要结果：加入fasudil培养心梗患者的内皮祖细胞可以增加细胞的分化、增殖、血管形成能力及内皮细胞标志物表达、抑制细胞的凋亡、减少Rho激酶蛋白的表达；细胞移植后，fasudil+EPC组大鼠心功能、心肌内小动脉数量和血流量均好于单独细胞移植和fasudil组，能减少心肌组织的纤维化，这与心肌组织内Rho激酶活性减低及增加NO合成有关。科学意义：本研究从体外和体内试验证实fasudil可以通过改善移植细胞的微环境，提升移植动物的心功能及心肌内血流量，为干细胞的临床应用提供新的思路和实验依据。