同时检测HIV抗原（P24）和基因降低窗口期的基础研究

国家卫生部2008年公布，在2007年全国法定报告传染病疫情中，艾滋病病例数较2006年上升了45.04%。我国在艾滋病的防治上，面临着非常严峻的形势。因此提高艾滋病的早期诊断率来有效缩小创口期，对遏制HIV传染和提高治疗效率具有非常重要的意义。本课题拟利用核酸信标配基检测技术（2003年国家自然科学基金资助项目）和基因检测技术对HIV- P24抗原和RNA进行同时检测，来提高检测准确率以有效缩小窗口期。核酸信标配基检测技术是利用指数级富集的配基进化系统（SELEX）筛选P24抗原的特异性寡核苷酸配基，再通过核酸信标配基分子构建，建立的核酸信标配基-PCR检测技术。该项技术和基因检测技术可以在同一检测水平上对病毒颗粒中的抗原和基因进行实时定量-PCR检测。这样既可提高抗原的检测灵敏度，也可提高了艾滋病基因检测的准确率。为艾滋病窗口期的检测提供有效的技术方法。

背景.目前对艾滋病至今尚无确切有效的药物，患者最终几乎都将死于反复的感染或肿瘤。如果早期筛选出HIV感染者并指导其采取健康的生活方式，使用抗病毒的药物、重建机体和免疫功能及积极治疗各种机会性感染，增加患者的生存机会显得极为重要。因此，建立一种灵敏性高、特异性强、高通量的检测方法缩短窗口期极为重要。.目的.本课题利用核酸适配体实时定量-PCR对蛋白和核酸同时检测技术，提高血液艾滋病毒的检测灵敏度和特异性，缩短窗口期，将有效提高艾滋病的检测率和治愈。.主要内容.1. HIV-p24抗原核酸信标配基的筛选及活性鉴定；.2. HIV-p24抗原核酸信标配基检测技术的研究；.3. HIV-p24抗原和HIV基因同时检测技术的研究。.重要结果.1.本课题筛选到 HIV-p24抗原的核酸信标配基，并进行活性鉴定；.2.建立以硝酸纤维素为载体的核酸信标配基实时定量-PCR检测技术；.3.建立以硝酸纤维素为载体 HIV-p24抗原和HIV基因同时检测技术的研究；.4.建立以琼脂磁珠双库适配体电泳筛选技术(拟申请专利)；.5.建立以琼脂磁珠为载体的蛋白和基因实时定量-PCR同时检测技术(拟申请专利)；.关键数据.1.建立以硝酸纤维素为载体的核酸信标配基实时定量-PCR检测技术；.2.建立以硝酸纤维素为载体 HIV-p24抗原和HIV基因同时检测技术的研究；.3.建立以琼脂磁珠双库适配体电泳筛选技术；.4.建立以琼脂磁珠为载体的蛋白和基因实时定量-PCR同时检测技术；.科学意义.1.利用以琼脂磁珠双库适配体电泳筛选技术，可完成对蛋白等多种靶分子的快速筛选，其配基特异性高，结合力强等；利用核酸信标配基实时定量-PCR检测技术，提高靶分子的检测灵敏度，该技术在生物医学等领域的普及、开发、应用具有重要意义；.2.利用蛋白等多靶分子实时定量-PCR同时检测技术，建立蛋白和基因实时定量-PCR同时检测技术，为提高生物体内多分子相关性研究，在蛋白质组学、基因组学、疾病分子检测监控等领域提供技术支持；.3.利用琼脂磁珠为载体的蛋白等多靶实时定量-PCR同时检测技术，结合磁珠基因提取和实时定量-PCR，可建立以琼脂磁珠为载体的蛋白和基因实时定量-PCR同时检测技术，该技术便于机械操作完成，为生物医学的发展提供技术支持。