胃癌血清标志物的筛选及检测技术的研究

Objective: screening tumor markers from gastric carcinoma serum through agar beads SELEX technology, and establishing a gastric carcinoma serum trace protein detection technology using agar bead nucleic acid beacon aptamer-PCR. Contents: agar beads with a carboxyl group as a vehicle, combined with serum marker proteins, screening specific aptamers from gastric carcinoma serum using target replacement and subtractive SELEX technology; establishing multi-serum molecular markers detection and analysis system using agar beads electrophoretic separation technology, combined with nucleic acid beacon aptamer- real-time quantitative PCR aptamer sensing detection technology(supported by the National Natural Science Foundation in 2003 ); then extracting specific marker proteins reversely using aptamers and identifying the specific marker proteins. Conclusion: Through the quantitative detection of multi-serum molecular markers, improve the detection sensitivity of markers and analysis of dosage – effect relationship, achieve the serum detection and monitoring of gastric cancer.

目的：利用琼脂磁珠核酸信标配基-PCR方法和靶标替换消减SELEX技术从胃癌血清中筛选肿瘤标志物配基，并建立胃癌血清微量蛋白组检测技术。研究内容：用羧基琼脂磁珠作为载体，结合血清标志蛋白，再利用靶标替换消减SELEX技术筛选胃癌血清特异性核酸配基；利用琼脂磁珠分离，及核酸信标配基实时定量PCR 配基传感检测技术（2003年国家自然科学基金资助项目），针对胃癌血清肿瘤标志物，建立血清多标志物分子检测分析体系，为胃癌血清分子检测提供新方法；再反向利用适配体提取特异性标志蛋白并进行蛋白分子鉴定。结果：通过对血清多标志物分子定量系统检测，实现对胃癌的检测监控。

胃癌是我国最常见且发病率较高的恶性肿瘤之一，严重威胁人类的生命健康。由于早期胃癌症状状不明显且缺乏成熟的筛查体系，发现往往已属进展期。提高早期胃癌的检出率，对改善胃癌的治疗有重要的意义。血清肿瘤标志物对胃癌的检测无创且易行，但存在敏感性、特异性低等问题，严重影响诊断效果。因此筛选高特异性、亲和力的胃癌血清肿瘤标志物核酸适配体是研究的关键所在。. 本项目基于靶标替换消减SELEX技术，建立了双向热循环消减SELEX技术；并以环氧基化琼脂磁珠为载体，分别对胃癌、肝癌、肺癌血清（10份血清混合液）及非癌血清（10份血清混合液）互相作为反筛靶标，筛选到三种肿瘤及非癌血清的特异性核酸适配体；再使用ELISA法对核酸适配体进行了亲和力、特异性的检测；分别对100例血清样本进行了验证实验研究，胃癌阳性检出率为92%。肝癌阳性检出率为94%，肺癌阳性检出率为90%；最后借助生物信息学软件对高通量测序获得的核酸适配体的序列信息及Label free非标定量调取的蛋白质组进行了研究，建立了快速、高效的肿瘤血清检测技术。 . 课题组通过扩大不同肿瘤血清标志物适配体的筛选，寻找胃癌、肝癌、肺癌和非癌血清的共性和差异性标志物，以期为肿瘤的血清学诊断及机理研究提供理论指导和技术支持。通过蛋白质组学和生物信息学方法进行了初步分析，希望能发现肿瘤血清特异性蛋白及其在代谢调节过程中的作用，探讨肿瘤的发病机制。