基于核心抗原高灵敏检测的丙肝窗口期诊断方法的研究

Due to the long latent period and the disability of the diagnosis in window period, Hepatitis C, which is named “silent killer”, has become a tremendous threat to the public health. Several reports support that HCV core antigen is the indicator for HCV early diagnosis which has not been widely used. In this project, based on our previous work, we plan to employ antibodies and aptamers as multi-recognition components and take the Time Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer technique as the main analyzing tools, accompanied by TEM, SEM, AFM and DLS as accessory research methods. Antibodies against the HCV subtypes epidemic in China will be selected. The modification of donors / acceptors onto the antibodies or aptamers will be investigated, to establish one or two assay strategies for HCV core protein. Additionally, the controllable self-assembling and the LAMP technologies will be researched, so that the nano-material based amplification and loop-mediated isothermal amplification strategies are introduce into the assay of HCV core protein. Finally, several ultrasensitive detection strategies will be established and examined via clinical samples, so that a systematic solution will be provide for the window-period diagnosis and blood screen to HCV in clinics.

丙型肝炎由于潜伏期长，窗口期诊断和筛查能力不足，被称为沉默的杀手；已经发展成为严重危害我国输血安全和公众健康的公共卫生问题。研究表明，HCV核心抗原是新的丙肝窗口期诊断的重要指标，但由于高灵敏检验方法的缺失，阻碍了该指标的临床推广应用。本项目拟在前期工作的基础上，利用HCV核心抗原的抗体和适配体作多元化识别元件，以时间分辨荧光能量转移分析技术为主要分析技术，辅以TEM、SEM、AFM、DLS等技术作为表征手段，针对我国高发的丙肝亚型，筛选高特异性抗体，研究供体/受体分子与抗体/适配体的耦联技术，设计构建多种基于时间分辨荧光能量转移技术的HCV核心抗原检测体系；通过研究可控分子自组装、恒温扩增等技术，分别引入基于纳米材料和核酸扩增的信号放大体系，开发HCV核心抗原超灵敏检测的方法，为临床丙型肝炎病毒的早期诊断和血液筛查提供系统的解决方案。

丙型肝炎由于潜伏期长，窗口期诊断和筛查能力不足，被称为沉默的杀手；已经发展成为严重危害我国输血安全和公众健康的公共卫生问题。研究表明，HCV核心抗原是新的丙肝窗口期诊断的重要指标，但由于高灵敏检验方法的缺失，阻碍了该指标的临床推广应用。本项目计划在前期工作的基础上，利用HCV核心抗原的抗体和适配体作多元化识别元件，以时间分辨荧光能量转移分析技术、流式分析等为主要分析技术，辅以TEM、SEM、AFM、DLS等技术作为表征手段，完成了稀土金属（Eu3+）配合物设计和合成、构建多种基于时间分辨荧光能量转移技术的HCV核心抗原检测体系。抗体对的筛选是本课题实施的关键，本课题实施过程中，从多个来源获得的十二支抗体进行了交叉筛选，未能获得有效的能满足荧光能量转移的抗体对。因此，我们在继续寻找合适的抗体的同时，及时对实验方案进行了调整。分为两方面进行开展。一是更换检测目标，以AFP为检测对象，验证本检测策略的有效性和合理性，二是，尝试新的HCV检测方法。调整后的研究内容均圆满完成，取得了不错的研究成果。在方法学验证方面，完成了对AFP的检测策略的设计和验证，实验表明，该时间分辨荧光能量转移策略的对临床样本的检测，性能与罗氏市售产品相当，样本用量要小于罗氏产品，经进一步优化，可以形成试剂盒，予以转化。在HCV检测方法方面，设计了3种HCV核酸高灵敏检测新策略，通过研究可控分子自组装、恒温扩增等技术，设计了开发HCV2种HCV核酸超灵敏检测新方法，为临床丙型肝炎病毒的早期诊断和血液筛查提供技术支撑。