UGT1A1不同基因型表达调控与新生儿高胆红素血症的关系研究

UGT1A1 is a key enzyme in bilirubin detoxification process in vivo. Researches showed that UGT1A1 genetic mutations are closely related to neonatal jaundice.Howewer,the relationship between different UGT1A1 mutant phenotypes and neonatal hyperbilirubinemia is unknown. In our previous research, we found that the mutations of G71R and Q239X are closely associated with neonatal hyperbilirubinemia and the different genotypes have different impact on neonatal hyperbilirubinemia . In order to investigate the association between UGT1A1 different phenotypes and neonatal hyperbilirubinemia , we build different recombinations of UGT1A1 G71R and Q239X and then transfect them into a host cell for expression in vitro, detecting the expression of UGT1A1 by means of RT-PCR and Western Blot,and UGT1A1 enzymatic activity by HPLC.Meanwhile,we examine the difference of UGT1A1 genotypic expression and emzymic activity under different condition .This study will reveal the pathogenesis of unknown neonatal hyperbilirubinemia from a viewpoint of the UGT1A1 expression regulation , and provide new concept to prevent and control neonatal jaundice.

UGT1A1是体内胆红素进行解毒作用的关键酶。UGT1A1基因突变与新生儿黄疸密切相关，但目前对UGT1A1基因突变所致的不同表型与新生儿黄疸关系还不清楚。我们前期研究发现UGT1A1基因G71R、Q239X突变型与新生儿高胆的发生密切相关，且不同基因型对高胆的影响程度有差异。为了探讨UGT1A1不同表型与新生儿高胆红素血症的关系，本研究拟构建UGT1A1G71R、Q239X不同基因型的重组体，并转染至宿主细胞进行体外表达，采用RT-PCR、Western Blot方法检测其表达，高效液相色谱（HPLC）比较其酶活性，并研究在不同条件下UGT1A1不同基因型的表达和活性的差异。实验结果将从UGT1A1表达调控视点揭示新生儿不明原因高胆的发病机制，为新生儿黄疸的防治提供新思路。

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1（UGT1A1）是体内胆红素进行解毒作用的关键酶。UGT1A1基因突变可影响UGT1A1的表达及其酶活性，使胆红素代谢减慢，导致高未结合胆红素血症。我们前期研究发现UGT1A1基因G71R、Q239X突变型与新生儿高胆红素血症的发生密切相关，且不同基因型对高胆红素血症的影响程度有差异。为了探讨UGT1A1不同表型与新生儿高胆红素血症的关系，本研究构建UGT1A1G71R、Q239X不同基因型的重组体，并转染至宿主细胞进行体外表达，采用RT-PCR、Western Blot方法检测其表达，高效液相色谱（HPLC）比较其酶活性，并研究在不同酶诱导剂作用下UGT1A1不同基因型的表达和活性的差异。研究结果：一、 UGT1A1基因mRNA的表达：应用实时荧光定量PCR法检测，结果表明：1.UGT1A1基因野生型，G71R纯合突变型、杂合突变型组mRNA表达分别为1、0.96、0.93 ，差异无统计学意义（p>0.05）；2.UGT1A1基因野生型、Q239X杂合突变型、Q239X纯合突变型组mRNA表达分别为1、0.90、0.88，其差异无统计学意义（p>0.05），说明G71R突变、Q239X突变并不影响UGT1A1基因转录的表达。二、UGT1A1蛋白的表达：应用Western blot检测，结果表明：1. UGT1A1基因野生型组、G71R纯合突变组、杂合突变组UGT1A1蛋白相对表达量分别为1.15、1.01、0.93，差异无统计学意义（p>0.05）； 2.UGT1A1基因野生型组、Q239X杂合突变型组、Q239X纯合突变型组UGT1A1蛋白相对表达量分别为1.56、0.98、0，差异有统计学意义（p<0.05）。说明G71R突变不影响UGT1A1基因的翻译，而Q239X杂合突变导致UGT1A1蛋白表达量明显减少，Q239X纯合突变导致UGT1A1蛋白不表达。三、根据葡萄糖醛酸结合反应原理建立孵育体系，利用HPLC法分析比较，分别用UGT1A1野生型及其G71R杂合型、G71R纯合型细胞模型匀浆催化非结合胆红素与UDPGA的酯化反应，UGT1A1野生酶使得结合胆红素的生成量最大，G71R杂合型、纯合型催化非结合胆红素生成结合胆红素的量分别为野生型的71%、22%。本研究从mRNA、蛋白、酶活性、表达调控多角度探讨UGT1A1突变基因