神经母细胞瘤DHRS4基因选择性剪接机制研究

辅酶II依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)由申请者首先纯化并鉴定，其编码基因DHRS4在神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)中存在异常的转录与剪接现象，提示NB细胞可能存在特殊的转录辅助因子和/或RNA剪接因子。申请者拟应用免疫沉淀、DNA亲合层析、染色质免疫沉淀、转染、RNAi等技术，研究神经母细胞瘤细胞中DHRS4的转录和剪接机制，鉴定出NB中存在的异常转录辅助因子和/或RNA剪接因子，验证它们与NB发生的相关性，转录辅助因子和/或RNA剪接因子的异常与神经母细胞瘤的发生相关。课题研究结果除可以为NB的发生提供新的理论依据外，鉴定出的转录辅助因子和/或RNA剪接因子还有可能成为NB诊断、治疗的新靶点，具有较强的潜在应用价值。

DHRS4基因编码的蛋白NRDR是NADP(H)依赖的视黄醇氧化还原酶，本课题主要研究了DHRS4基因簇的选择性剪接亚型及转录相关的剪接调控因子。课题首先通过RT-PCR和蛋白质谱鉴定了DHRS4基因选择性剪接亚型编码的蛋白，以及亚型NRDRB1作为氧化还原酶对不同底物的催化活性。经过生物信息学分析比对课题组和数据库登录的DHRS4基因簇的剪接亚型，发现exon a剪接缺失的规律，并推测选择性启动子的剪接位点以及反义RNA可能参与DHRS4L2和DHRS4L1基因exon a剪接缺失。最后通过RNA干扰、实时定量PCR、染色质免疫共沉淀技术验证DHRS4自然反义转录本AS1DHRS4作为长的非编码RNA，在表观遗传学水平通过DNA甲基化和组蛋白修饰调控DHRS4、DHRS4L2和DHRS4L1基因的转录起始活性。