神经母细胞瘤中ALK基因异常的分子机制及其作用

神经母细胞瘤（NB）是婴幼儿期常见的实体肿瘤，临床上疾病进展快，治疗效果差，预后多不佳，其分子发病机制尚未完全阐明。在NB中，常有 ALK基因的异常表达和N-MYC基因的扩增。我们采用免疫组化的方法对85例NB患者标本进行分析，发现32（38%）例有ALK蛋白的异常表达。本研究进一步采用FISH和DNA测序方法对ALK和N-MYC基因扩增和ALK基因融合及其点突变进行分析，同时用免疫组化的方法对ALK蛋白激酶的配体PTN和MK表达水平进行研究，试图在分子水平阐明ALK基因异常表达的机制，同时在体外细胞水平进一步深入研究ALK基因异常和NB发病之间的关系，以及它和N-MYC基因扩增在NB发生发展中的相互作用。最终目的是要证明，不同因素引起的ALK 蛋白激酶异常表达是否是NB发病的原因，其意义在于为将来ALK激酶的靶向药物-ALK蛋白激酶抑制剂，在NB中的临床应用提供分子生物学的机理。

神经母细胞瘤（NB）是儿童最为常见的颅外实体肿瘤之一，通常在婴儿期发病。诊断时多数属高危患者患者，对化疗耐受，死亡率高。ALK基因是近几年发现与NB发病相关的重要基因。本研究对84例NB患者ALK基因异常的分子机制进行了深入的探讨，同时对ALK基因活化与N-myc基因扩增和Akt/mTOR通路活化的关系进行了相关性分析。我们采用了直接DNA -PCR扩增和测序检测了ALK激酶区域点突变，采用了FISH方法检测ALK和N-myc基因扩增，同时采用了免疫组化方法检测了ALK，磷酸化ALK，磷酸化mTOR，磷酸化4E-BP1以及磷酸化 p70S6K的表达。我们的研究结果提示ALK基因点突变导致ALK和磷酸化ALK蛋白的高表达，并激活下游的Akt/mTOR信号通路。在１５例同时有ALK 和N-myc基因扩增的患者，他们预后很差，提示ALK和N-myc基因之间可能有协同作用。生存期分析发现高表达的ALK，磷酸化ALK，磷酸化，磷酸化Akt， p70S6K蛋白，以及N-myc基因的扩增具有预后意义，其中磷酸化ALK，磷酸化Akt和N-myc基因扩增具有独立的预后意义。我们的结果发现ALK和磷酸化ALK蛋白的高表达是ＮＢ中新的预后因素。免疫组化方法检测ALK蛋白异常有助于评价ＮＢ的预后，ALK激酶抑制剂能够成为ＮＢ的有效治疗手段。. 目前此研究已经圆满完成，研究结果已经多次在学术会议中交流，已经发表SCI 论文篇。