基于VEGF调控的人参与丹参促血管新生协同作用及机制研究

近年来的研究表明：人参与丹参均具有促血管新生的双向调节作用，但其吸收入体内成分的组织分布及其与血管新生的协同作用关系不清楚。我们前期药动学研究表明人参能够使丹参的体内成分血药浓度升高和消除期延长，在此基础上，结合大鼠心肌缺血模型和乳鼠心脏微血管内皮细胞，创新性提出"方证对应效应物组学"的概念，采用HPLC-MS联用和分子生物学技术，以方剂体内成分为靶标，以VEGF调控为切入点，建立人参与丹参的体内效应成分在血液和心肌组织的分布及其与VEGF/VEGFR-2表达的动态相关性分析模型，在时间－组织空间－浓度上研究人参与丹参促血管新生的协同作用，进一步通过体外VEGF/VEGF-2的信号通路调控机制，探索其协同作用分子机制。本项目是从系统、器官、细胞分子等水平，揭示人参与丹参治疗冠心病的效应物质基础和配伍规律，阐释病证状态对方剂独特处置的科学内涵，为临床应用提供科学的实验依据。

本项目在“方证对应效应物组学”研究思路的指导下，研究了以人参与丹参组成的双参通冠方防治冠心病促血管新生的协同作用机制。1）采用HPLC法对人参与丹参合煎与分煎的有效成分进行了测定，明确了主要成分是人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3和丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛等；2）对双参的大鼠体内多成分的药动学特征进行了研究，结果表明人参能够使丹参的体内效应成分血药浓度升高和消除期延长，在吸入体内有效成分上具有协同关系；3）双参对大鼠心肌梗死模型的血流动力学研究，结果表明其可增加大鼠心脏搏出量、降低心肌耗氧量和血管外周阻力；4）双参对大鼠心肌梗死模型的血管内皮功能的影响，研究表明其主要是通过降血脂、抑炎性反应和调节NOS以改善血管内皮功能。5）人参与丹参配伍促血管新生作用的研究，采用鸡胚绒毛尿囊膜模型，结果表明双参组具有明显的血管新生作用，采用大鼠角膜研究模型，结果表明人参皂苷Rg3具有抑血管新生作用；丹酚酸B具有较强促血管新生作用，主要是通过调控VEGFR-2介导VEGF使血管内皮细胞增殖和迁移，增加血管通透性，促进血管新生。由于人参PPD组能使丹参的酚酸类成分的体内血药浓度升高和消除期延长，因此可以推断人参与丹参水溶性成分具有促血管新生的协同作用。6）双参通冠胶囊对冠心病稳定性心绞痛患者血脂和血液流变学的影响，临床观察表明其可显著改善患者的血脂、血液流变学指标和中医证候积分。7）双参通冠胶囊对急性心肌梗死直接PCI术后患者的影响及其临床疗效评价，临床观察证实其能够改善患者的心绞痛症状，具有一定的改善心肌微循环血流灌注作用，可以提高患者的心功能和生活质量。8）双参促血管新生的作用机制研究，采用大鼠心肌缺血模型，观察其对VEGF、VEGFR1、VEGFR2 mRNA的表达，结果表明：双参1:2组＞双参2:1组＞双参1:1组＞丹参组＞人参组；采用乳鼠心脏微血管内皮细胞（CMEC），研究了人参与丹参对VEGF/VEGFR-2表达的下游信号通路的调控机制，结果表明，主要是PI-3K/Akt-eNOS-MEK/ERK1/2的通路促进对eNOS mRNA的表达，对心肌细胞凋亡可能与升高 Bax、STAT-3的表达及降低IL-6、GAPDH的表达相关，但具体的调控机制还不完全清楚。本项目的研究初步揭示人参与丹参防治冠心病促血管新生的效应物质基础和配伍规律，为临床应用提供科学的实验依据。