针对滑膜肥大细胞(MCs)等相关细胞因子(TNF、IL-1、IL-6等)的生物制剂已用于类风湿性关节炎(RA)治疗。循证医学发现,经上述治疗后,约40%患者在阻止软骨和骨侵蚀方面疗效欠佳,提示有其它机制参与RA发病。组织蛋白酶G、C、K和基质金属蛋白酶2、9与软骨和骨破坏关系密切。但在RA发病中,MCs能否影响组织蛋白酶和基质金属蛋白酶分泌和表达国内外未见报道。我们采用MCs基因敲除小鼠Kit W-sh/W-sh建立RA模型,验证MCs缺失小鼠不发生关节炎或比野生型小鼠关节炎轻,揭示MCs在RA发病中的作用;MCs与成纤维细胞共培养,了解MCs对其增殖、凋亡,以及上述蛋白酶的影响;用野生型小鼠骨髓源性MCs注入Kit W-sh/W-sh小鼠中,观察关节炎的改变、软骨和骨组织中上述蛋白酶的变化。阐释MCs可能通过促成纤维细胞分泌上述蛋白酶导致软骨和骨破坏,为寻找RA治疗的新靶点提供实验依据。
我们对C57BL/6小鼠进行了骨髓源性肥大细胞(BMMCs)、关节软骨细胞、滑膜类成纤维细胞和腹腔巨噬细胞四种细胞的原代培养。发现PeproTech公司市售的重组小鼠IL-3并不适合BMMCs的培养,我们有幸从施教授实验室获得质粒重组的菌株提纯小鼠IL-3蛋白;关节软骨细胞原代培养中采用0.25%胰酶和IV型胶原酶消化法,可缩短消化时间,获得的细胞纯度无降低;滑膜成纤维细胞原代培养采用关节周围滑膜组织要优于关节间滑膜组织,后者获得的细胞数和纯度低于前者;腹腔巨噬细胞在体外可存活超过1月,但细胞数降低明显,尤其是体外培养的第一周。对关节软骨细胞、滑膜类成纤维细胞和腹腔巨噬细胞进行组织蛋白酶(Cathepsin)C、G的Western blot检测,未发现阳性结果,与预期设想不一致。对C57BL/6进行II型胶原抗体腹腔注射的CAIA模型,需采用更大剂量(5mg/只),获得的动物模型仍不稳定。
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数据更新时间:2023-05-31
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