孕激素对阴道黏膜胸腺间质淋巴细胞生成素的调节在女性无症状淋球菌感染中的作用机制研究

大部分女性下生殖道淋球菌感染都是无症状的，其具体机制目前尚不明了。本课题组前期实验证实女性淋病患者体内孕激素水平的增高是导致无症状感染的重要原因。但孕激素是通过何种机制来抑制免疫应答，最终导致淋球菌无症状感染仍有待研究。胸腺间质淋巴细胞生成素（TSLP）主要由粘膜上皮组织合成，其主要功能是抑制促炎因子表达，并可抑制Th1型免疫应答、促进Th2型免疫应答。我们推测在阴道微环境下孕激素作用元件可与NF-КB作用，活化TSLP启动子，促进TSLP表达并导致粘膜免疫向Th2型迁移，最终使吞噬细胞杀菌功能下调，促炎因子表达下降，而导致淋球菌无症状感染。本研究拟建立孕激素化小鼠淋球菌性阴道炎模型，采用全基因组芯片、蛋白双向电泳、生物信息分析等方法研究孕激素与TSLP在淋球菌性阴道炎发病机制中的作用，探讨孕激素作用元件通过TSLP网络对阴道粘膜免疫的调控机制，为女性无症状淋球菌感染的防治提供理论。

收集无症状淋球菌阴道炎患者和正常妇女阴道分泌物及血清标本，检测血清中孕酮水平及阴道分泌物中TSLP，IL-1β，TNF-α水平。结果显示血清中孕酮水平与阴道分泌物中TSLP水平呈正相关，与IL-1β，TNF-α水平呈负相关。建立雌性小鼠生殖道淋球菌感染模型（感染组）及孕激素化感染模型（孕激素化组），结果显示孕激素可减少阴道局部中性粒细胞渗出，延长感染时间。孕激素化组小鼠阴道组织TSLP mRNA和蛋白表达水平均明显高于感染组，淋巴结组织T-bet，RoRrt mRNA和蛋白表达减低，GATA-3 ，Foxp3 mRNA和蛋白表达增高。给孕激素化感染模型提前腹腔内注射抗小鼠TSLP单克隆抗体，结果显示TSLP抗体组淋巴结组织T-bet，RoRrt mRNA和蛋白表达升高，GATA-3 ，Foxp3 mRNA和蛋白表达降低。由此可见，抗TSLP抗体能逆转孕激素引起的T细胞亚群偏移。体外培养小鼠阴道上皮细胞，结果显示随着孕酮浓度的增高，细胞内NF-κB活性逐渐降低，细胞培养上清中TSLP含量逐渐增加。加入10-8mol/L或10-7mol/L孕酮能明显抑制NF-κB活性，促进TSLP的分泌。将小鼠阴道上皮细胞与小鼠脾单个核细胞体外混合培养，结果显示抗TSLPR抗体可逆转孕激素引起的T细胞亚群偏移。其成果有利于阐明妇女无症状淋球菌感染的机制，并可为该病的诊治提供新的思路。