2447nt-489nt乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白与肝细胞蛋白相互作用研究

2447nt-489nt乙型肝炎病毒（HBV）剪接变异体在慢性乙型肝炎患者中大量存在，其编码的剪接特异性蛋白HBSP与致病性密切相关,但确切机制不明。本研究在已完成HBSP酵母双杂交筛选与初步验证的基础上，首先以免疫共沉淀、细胞双杂交及激光共聚焦等方法再次验证HBSP与三种肝细胞蛋白(即FGG、EPHX1、CTSB)的相互作用，并确定HBSP功能区域；随后研究HBSP对FGG、EPHX1及CTSB相关功能的影响，并以此综合评价HBSP的致病性，其中包括FGG相关的凝血及血小板凝集过程，EPHX1相关的肝脏微粒体酶对化学致癌物的解毒功能，CTSB相关的肝癌细胞株侵袭能力及肿瘤坏死因子α介导的细胞凋亡。本研究将深化对HBV剪接变异体致病机制的认识，为发展更为有效的HBV防治手段提供新思路。

本研究旨在探讨2447nt-489nt乙型肝炎病毒（HBV）剪接变异体编码的剪接特异性蛋白HBSP的致病性。我们首先以GST-pull down、免疫共沉淀、哺乳动物细胞双杂交及激光共聚焦等方法确定HBSP与组织蛋白酶B（cathepsin B，CTSB)、微粒体环氧化物水解酶（microsomal epoxide hydrolase 1, mEH或EPHX1)及纤维蛋白原γ链（fibrinogen gamma chain ，FGG)存在相互作用，并且这种相互作用通过HBSP 蛋白N端47个氨基酸介导。我们随后研究了HBSP与这些细胞蛋白相互作用导致的生物学效应。结果表明：1. HBSP与FGG相互作用可干扰机体的凝血，是肝病患者具有出血倾向的原因之一；2. HBSP通过与CTSB的相互作用促进肝癌细胞株侵袭和迁移，从而增强肝癌细胞株的侵袭能力；3. 证实HBSP在体外能促进肝微粒体中mEH活性，加速苯并比（B[a]P）的代谢率并增加最终的致癌产物BPDE，提示HBSP可增加苯并比的致癌性。本研究证实HBSP具有多方面的重要的致病性，这对于更为全面深入了解HBV的致病性具有积极意义。