神经胶质瘤相关miRNA的鉴定及功能分析

神经胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，占颅脑肿瘤的40-50%，由于发生、发展机制不清，无较好的治疗手段，病人的存活期（中值）一般为1年，五年存活期不到5%近几年,发现 miRNA与癌症的发生、发展有着密切的关系，而且改变miRNA的表达能在体内抑制肿瘤的增长。因此，本课题组将进行以下研究：（1）利用第二代高通量测序技术(Illumina)比较脑胶质瘤和正常脑组织的miRNA表达谱差异，重点分析新的小RNA；（2）对上一步中找到和验证过的在脑胶质瘤和正常脑组织有差异的小RNA miR127 和miR433,构建病毒载体，建立稳定高表达细胞系，在体外细胞和小鼠模型中确定其在神经胶质瘤中的作用。（3）研究小RNA miR127 和miR433的靶基因（如BCL6）在神经胶质瘤中的作用,从而发现miR127 和miR433在神经胶质瘤的作用机理。

MicroRNA (miRNA)是长度为20-25个核苷酸的小非编码RNA,它们可以通过与靶基因3’UTR区的序列特异性结合转录后调控基因的表达。MiRNA参与多种病理生理过程,是调节细胞信号通路包括肿瘤细胞迁移和扩增的重要因子。神经胶质瘤是最常见的颅内肿瘤之一,虽然诊断和治疗技术飞速发展,恶性神经胶质瘤的预后仍然很差,其中神经胶质母细胞瘤的平均生存期只有12-15个月。神经胶质母细胞瘤的发生和发展是一个多步骤的过程,期间受到很多因子的调控。最近几年miRNA在神经胶质母细胞瘤的发生发展中的潜在作用被深入的研究。.我们通过第二代高通量测序以及荧光定量PCR发现与正常脑组织相比miR-127-3p在神经胶质母细胞瘤组织中表达量下调。进一步研究显示DNA的甲基化和组蛋白去乙酰基化造成了miR-127-3p表达量的下调。我们通过体内外实验证实了miR-127-3p通过诱导G1期阻滞抑制了神经胶质母细胞瘤细胞的生长。另外我们证实了miR-127-3p的五个靶基因SKI,RGMA,ZWINT,SERPINB9和SFRP1,最后我们发现miR-127-3p通过抑制肿瘤抑制因子SKI激活起到肿瘤抑制作用的TGF-β信号通路抑制神经胶质母细胞瘤细胞的增殖。据我们所知,SKI在神经胶质瘤中的作用还没有被报道过,我们的研究首次提出了SKI在神经胶质母细胞瘤中发挥作用的证据。.我们发现在几个人类神经胶质母细胞瘤细胞系miR-127-3p的表达量与细胞的迁移和侵袭能力正相关。经体外细胞系和裸鼠体内实验均证实miR-127-3p促进神经胶质母细胞瘤细胞的迁移和侵袭。证实了已被报道抑制神经胶质母细胞瘤迁移和侵袭的肿瘤抑制因子SEPT7是miR-127-3p的靶基因,并且SEPT7能够部分抵消miR-127-3p对细胞迁移和侵袭的作用。另根据芯片数据显示miR-127-3p能够调控更多与细胞迁移和侵袭相关的基因。进而我们证实了在神经胶质母细胞瘤细胞miR-127-3p通过调节SEPT7影响actin细胞骨架的重塑。.我们的研究表明，miR-127-3p在神经胶质母细胞瘤中是一个关键的因子，也是一个潜在的神经胶质母细胞瘤治疗靶点。