基于动态队列开展TTP参与系统性红斑狼疮发病的分子流行病学研究

In our previous studies, Th17 cells and related cytokines were found to play important roles in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus (SLE). Recent evidence suggested that Tristetraprolin (TTP) performs significantly in the Th17 signaling pathways. TTP is an RNA-binding protein, belongs to the CCCH zinc finger proteins family. TTP regulates IL-23 and thereby affects the Th17 signaling pathways or directly suppresses Th17 related cytokines expression such as IL-17. These findings suggested that aberrant TTP expression/function may cause the dysregulation of Th17 signaling pathways, and thus lead to SLE disease onset. In this study, based on the established dynamic cohort, case-control study and cohort study were combined to conduct molecular epidemiological study on the role of TTP in SLE pathogenesis. We will analyze the relationship between TTP polymorphisms and SLE genetic susceptibility, clinical subtypes, detect TTP mRNA expression levels in PBMC, protein levels in CD4+ T cell, DC and Th17 related cytokines in serum of SLE patients. These findings may confirm the relationship between TTP and SLE pathogenesis preliminarily, and finally determine the value of TTP as a molecular marker of SLE combining with the clinical follow-up data.

课题组前期研究发现Th17及其相关细胞因子在系统性红斑狼疮（SLE）的发病中起重要作用。最新证据表明，TTP（Tristetraprolin）参与了Th17通路的调节。TTP属于CCCH锌指蛋白家族，是一种RNA结合蛋白，可通过调节IL-23影响Th17通路或直接抑制Th17细胞因子IL-17表达。由此推测，TTP表达/功能异常可导致Th17通路紊乱，从而引起SLE的发病。本项目拟基于已建立的动态队列，采取病例对照研究与队列研究相结合的策略，开展TTP与SLE发病的分子流行病学研究。主要通过分析TTP基因多态性与SLE遗传易感性及临床亚型的关联，检测SLE患者PBMC中TTP的mRNA水平、CD4+T细胞和树突状细胞（DC）中TTP的蛋白水平、血清中Th17相关细胞因子的蛋白表达水平，初步证实TTP与SLE的关联。在上述研究结果基础上，结合临床随访资料探讨TTP作为SLE分子标记物的价值。

本项目采用病例对照研究，采用TaqMan基因分型方法，分析TTP基因多态性与SLE遗传易感性的关系；采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术，检测SLE患者与正常对照、活动期SLE患者与非活动期SLE患者、狼疮肾炎（LN）患者与非肾炎患者的外周血单个核细胞（PBMC）中TTP基因mRNA表达水平的差异，并分析TTP基因mRNA表达水平与SLE疾病活动度、临床特征和实验室指标的关联。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测SLE患者血浆中TNF-α、IL-6、IL-10、IL-17、IL-21、IL-22和IL-23的表达水平，并分析PBMC中TTP基因mRNA表达水平与血浆TNF-α、IL-6、IL-10、IL-17、IL-21、IL-22和IL-23水平的关联；采用蛋白质印迹法（WB）检测SLE患者与正常对照、LN患者与非LN患者、活动期SLE患者与非活动期SLE患者的外周血CD4+T细胞中TTP蛋白表达水平的差异，分析TTP蛋白表达水平与SLE疾病活动度、临床特征和实验室指标之间的关联情况，以期为发现新的生物标记物提供参考，进而为SLE的诊断和临床治疗提供依据。结果发现，在中国汉族人群中TTP基因rs251864和rs3746083位点多态性与SLE的易感性无关，rs251864位点多态性可能与SLE患者合并口腔溃疡有关。SLE患者与正常对照PBMC中TTP mRNA表达水平无统计学差异，活动期SLE患者与非活动期SLE患者相比TTP mRNA表达水平无统计学差异，SLE合并LN患者PBMC中TTP基因mRNA表达水平低于非LN患者。SLE患者TTP基因mRNA表达水平与蛋白尿和抗dsDNA抗体阳性有关。SLE患者TTP基因mRNA表达水平与血浆TNF-α、IL-17水平呈负相关。SLEDAI评分与TTP基因mRNA表达水平无明显相关性。未发现TTP基因rs251864、rs3746083位点多态性与mRNA水平的关联。SLE患者与正常对照、活动期SLE患者与非活动期SLE患者、LN患者与非LN患者之间外周血CD4+T细胞中TTP蛋白表达水平均无统计学差异，SLE患者外周血CD4+T细胞中TTP蛋白表达水平与发热这一常见临床特征存在关联。SLEDAI评分与TTP蛋白表达水平无明显相关性。