成纤维细胞生长因子受体2（FGFR2）在ASCs修复尿道缺损中作用的实验研究

Long urethral stricture has bothered urologists for years due to the lack of optimal substiute tissue. Tissue engineering shows us a new way to treat the disease. Adipose stem cells（ASCs）have the potential of clinical application. ASCs seeded scaffolds show good results in urethra reconstruction. But it is still unknown that how did ASCs differentiate in vivo.Fibroblast growth factor and fibroblast growth factor receptor (FGF/FGFR) mediate a broad range of cell funcitons,including proliferation and differentiation. FGFR2 plays an important role in the maturation of urothelium.So we presume that ASCs differentiate into urothelial cells in vivo by FGFR2 through FGF signalling.In this study, to tesify the important role of FGFR2 in ASCs differentiation, we use lentivirus to knock down or overexpress the FGFR2 expression level in ASCs and analyse its differentiation status in vivo.

长段尿道狭窄和缺损因缺乏合适的替代材料是泌尿外科的棘手问题。组织工程学给我们提供了新的方法和思路。脂肪干细胞（ASCs）是具有临床应用潜力的种子细胞，前期研究提示其可同支架材料修复尿道缺损，但其在体内分化的机制并不明确。成纤维生长因子及其受体（FGF/FGFR）调控广泛的细胞功能，包括细胞的增殖和分化。FGFR2被认为是尿路上皮成熟的关键因素。因此我们推测ASCs表达FGFR2通过FGF通路调节其在体内向尿路上皮的分化。本研究利用慢病毒过表达或敲低FGFR2在ASCs的表达水平，观察相应ASCs在体内的分化情况，证实FGFR2在ASCs分化中起到重要作用，为促进尿路修复寻找新的靶点。

长段尿道狭窄和缺损的修复是泌尿外科的棘手问题。组织工程学给我们治疗长段尿道狭窄和缺损提供了新的方法和思路，寻找合适的组织工程化尿道材料至关重要。脂肪干细胞（ASCs）是具有临床应用潜力的种子细胞，诸多实验证明了脂肪干细胞的安全性和可靠性，定向改造脂肪干细胞可以更好地发挥其修复潜能。另一方面，合适的支架材料也是构建组织工程话尿道的关键。. 本研究中，我们成功提取培养了脂肪干细胞，并取P3代细胞进行流式鉴定和成骨成脂鉴定，根据既往研究表明，成纤维生长因子受体2（FGFR2） 在外生殖器的正常发育中起到重要作用，内胚层细胞敲除 FGFR2 导致尿道下裂并抑制尿道上皮的成熟，外胚层细胞敲除 FGFR2更导致严重的尿道下裂和腹侧包皮的缺失。我们利用慢病毒转染的方法，成功在脂肪干细胞中过表达了FGFR2。过表达FGFR2基因的脂肪干细胞增殖和迁移侵袭能力明显增强，这表明过表达FGFR2可以使脂肪干细胞更好的迁移到受损部位并进行修复。另一方面过表达FGFR2后，脂肪干细胞的分化能力得到增强。. 材料方面，我们和郑裕东教授团队研发了缓释丝裂霉素C的（MMC）的改性大豆蛋白氧化细菌纤维素支架材料。力学试验证实本材料力学特性优良，细胞相容性较好。动物学实验证实单纯氧化细菌纤维素材料生物相容性良好，炎性反应较少，其治疗效果等效甚至优于临床上使用的去细胞真皮基质（ADMG）材料，尿道造影和尿道镜显示1个月尿道完整性和连续性既得到恢复。接下来将进一步探寻缓释MMC的改性大豆蛋白氧化细菌纤维素支架材料负载过表达FGFR2的脂肪干细胞这种复合材料进行尿道狭窄修复的有效性和安全性。. 除此之外，由于炎症反应是尿道狭窄患者发生术后再狭窄的主要病理机制，我们还探寻了炎症因子刺激下，我们发现miR-155-5p的表达发生了显著差异并进行了验证，且炎症因子处理的脂肪干细胞明显抑制外周血单个核细胞（PBMCs）的增殖。