不同生长特性的听神经瘤细胞对听神经瘤生物学行为的影响

听神经瘤为良性肿瘤，但威胁患者生命，且生物学行为多样。本课题组前期工作中发现听神经瘤组织中磷酸化merlin的表达与肿瘤大小有关，并与ras信号传导通路的表达一致；通过细胞培养的方法证实在体外磷酸化merlin能促进细胞增殖，其机制是通过激活Ras通路而实现。磷酸化merlin表达不同可能是听神经瘤不同生物学行为的分子机制。本课题拟采用原代培养的方法，将不同生长速度肿瘤细胞分选，观察merlin及磷酸化merlin的表达情况，分析在实体肿瘤细胞中磷酸化merlin与Ras通路信号传导的关系及其相互影响；并进一步采用体外实验方法建立NF2基因表达或缺失的神经鞘膜瘤细胞模型，观察merlin及其磷酸化对神经鞘膜肿瘤细胞生长的影响，以期揭示听神经瘤发生发展的分子基础。

听神经瘤，为最多见内听道及桥小脑角良性肿瘤，以听力下降、耳鸣为典型临床表现，肿瘤增大可压迫脑干产生严重症状、威胁患者生命。临床发现听神经瘤生物学行为多变，生长方式不一，治疗需个体化。从分子生物学角度阐述其生长机制，对于治疗策略选择具有重要意义。. 首先，本研究组综合采用标准测序+多重连接依赖探针扩增技术（multiple ligation-dependant probe amplification，MLPA）检测患者听神经瘤组织中NF2基因突变和大片段缺失率累计达81.8%。. 其次，因NF2基因编码听神经瘤生长机制中最重要蛋白merlin，本研究组通过免疫组化方法在不同生物学行为的听神经瘤组织中发现磷酸化merlin表达不一：快速生长、大型肿瘤均可见磷酸化merlin的表达，慢速生长、小型肿瘤中磷酸化merlin表达不明显，且磷酸化merlin在听神经瘤组织中的表达与ras信号传导通路的表达一致。进一步，通过细胞培养方法证实在体外磷酸化merlin能促进细胞增殖，其机制通过激活Ras通路实现，从而证实磷酸化merlin表达不同可能是临床上听神经瘤表现为不同生物学行为的分子生物学机制。. 再次，本研究组通过引入HCT116/4016 (p53+/+)和HCT116/379.2 (p53-/-)细胞系确定NF2-merlin对细胞周期调控和细胞生长的作用是否需要依赖p53的状态。通过shRNA-慢病毒系统沉默NF2-merlin，能够在HCT116/4016 (p53+/+)细胞系促进细胞生长和影响细胞周期，但在HCT116/379.2 (p53-/-)细胞系无此作用,结果提示merlin与p53存在共表达作用。. 综上所述，NF2基因突变、merlin磷酸化所导致的merlin抑癌功能丧失，导致听神经瘤细胞的不同生长特性，进而影响听神经瘤生物学行为。