Tetraspanin-7抗原特异性CD8+T细胞与胰岛免疫损伤进程异质性的研究

Antigen-specific CD8+T cells are the key of βcell destruction in type 1 diabetes mellitus(T1DM). It is pivotal for searching T cell epitopes in early diagnosis and immunotherapy of T1DM. Several studies found that there is great heterogeneity in islet function decline; even 15 dominant T cell epitopes cannot fully explain the decline of islet function, which suggest unknown epitopes. Tetraspanin-7 (Tspan7) is newly discovered as an islet autoantigen, and then we applied the T cell epitope technique to detect a possible pathogenic epitope. Therefore, we hypothesized that Tspan7 may be the target antigen of persistent islet failure after clinical onset of T1DM, and Tspan7 specific CD8+T cell is the key of islet immune destruction. The applicant intends to search for Tspan7 specific CD8+T cells using HLA-A2.1 transgenic HHD mice and ELISPOT technology; map Tspan7 epitope spectrum; dynamically monitor the relationship of Tspan7 antigen specific CD8+T cell response-exhaustion and islet immune destruction by Tetramer technology. Paving a new way for antigen specific T cell immunotherapy.

胰岛抗原特异性CD8+T细胞是致1型糖尿病(T1DM)胰岛β细胞损伤主要原因。寻找其T细胞表位是T1DM早期诊断及免疫治疗关键。国外和本课题组研究发现，T1DM胰岛功能下降存在异质性，已知15个优势T细胞表位不能完全解释胰岛功能进行性下降，提示存在未知表位。16年新发现Tetraspanin-7(Tspan7)是胰岛自身抗原，随后我们应用已有T细胞表位技术首次发现一个可能致病表位。故我们假设Tspan7可能是临床发病后胰岛功能持续衰竭靶抗原，其特异性CD8+T细胞是胰岛免疫损伤关键。申请人拟用ELISPOT 技术，在HLA-A2.1转基因HHD鼠、T1DM患者、人胰岛寻找Tspan7特异性CD8+T细胞；应用T1DM数据库绘制Tspan7表位谱；采用Tetramer T细胞技术动态观察Tspan7特异性CD8+T细胞应答-耗竭失衡与胰岛免疫损伤进程关系。为抗原特异性T细胞免疫治疗探索新路。

胰岛抗原特异性CD8+T细胞是致1型糖尿病(T1DM)胰岛β细胞损伤主要原因。寻找其T细胞表位是T1DM早期诊断及免疫治疗的关键。Tetraspanin-7(TSPAN7)是2016年新发现的胰岛自身抗原，我们推测其是T1DM 临床发病后胰岛持续衰竭的靶抗原之一，其特异性CD8+T细胞是胰岛免疫损伤关键。本课题应用生物信息学表位预测系统数据库，预测得到24个HLA-A*0201限制性的TSPAN7多肽序列。应用 ELISPOT (酶联免疫斑点检测)等技术，在 T2 细胞-HLA-A2.1 转基因 HHD 鼠-人体(T1DM 患者)水平寻找TSPAN7抗原特异性 CD8+T 细胞，在HLA-A2.1转基因HHD鼠与T1DM患者水平均证实TSPAN7-1、TSPAN7-2、TSPAN7-8、TSPAN7-14、TSPAN7-23是T1DM 的TSPAN7特异性HLA-A2限制性CD8+T表位。选择阳性率较高的表位制备Tetramer，但发现其亲和力较低，本研究适当调整实验方案，利用Tetramer技术制备ZnT8特异性Tetramer，并在T1DM患者外周血中检测出ZnT8抗原特异性T细胞，研究发现中空腹C肽<3.33pmol/L和>3.33pmol/L两组ZnT8抗原特异性CD8+T细胞比例无统计学差异（P>0.05）。胰岛功能下降速率快和慢两组的ZnT8特异性CD8+T比例未见明显差异（P>0.05）。本研究发现TSPAN7特异性的HLA-A2.1限制性CD8+T 细胞表位，证实其特异性CD8+T细胞参与胰岛免疫损伤, 补充完善了已知抗原特异性 T 细胞表位谱。本研究未发现不同胰岛功能状态、不同胰岛功能下降速率与ZnT8抗原特异性CD8+T细胞的关联，未来将前瞻性观察抗原特异性T细胞与胰岛免疫损伤进程的关系，为抗原特异性免疫治疗探索新路。