微小隐孢子虫子孢子噬菌体展示文库的构建及功能基因的筛选

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患寄生虫病，目前该病尚无有效的防治药物。该病最主要的临床症状是腹泻，但引起腹泻的确切机制尚未阐明。本研究拟采用目前最新的Shotgun phage display 法，将隐孢子虫子孢子的cDNA片段克隆到噬菌粒载体中主要外壳蛋白Ⅷ(gPVIII )基因的N端，与其融合表达到噬菌体颗粒的表面，然后用多抗和已制备出的针对微小隐孢子虫子孢子表膜的单抗进行淘筛，获得能够特异性结合的噬菌体克隆。将获得的基因与Gene Bank 中的已知基因比较分析，用分子生物学软件对其功能进行初步分析。然后，将获得的基因在体外大量表达，制备抗血清，进行体外阻断实验和动物接种实验，观察其对虫体侵入、虫体毒力的影响及其免疫保护力。以期获得具有自主知识产权的微小隐孢子虫子孢子功能基因，为阐明其致病机制提供依据。