基于miR155-IL-6-STAT3/SOCS1信号交互调控“虚、瘀”状态下溃疡性结肠炎的病理机制及溃结宁膏穴位敷贴的干预作用

Ulcerative colitis (UC) is a common result of repeated intestinal inflammatory response and immune imbalance.The study showed that IL-6-STAT3 / SOCS1 signal interacts with UC's inflammation and immune tolerance, while miR155 is a key factor in the upstream regulation of this signaling pathway.Early clinical application of Kui Jie Ning Plaster point application treatment of spleen and kidney yang deficiency type UC achieved significant effect, the mechanism is to reduce the release of proinflammatory factors and inhibit the immune over-activation.Therefore, we speculate that the Kui Jie Ning Plaster point application may play an regulatory role in the upstream of the inflammatory signaling pathway, that is, through the miR155-IL-6-STAT3/SOCS1 signal to regulate UC inflammation and immune tolerance.In the study, we establish “deficiency and stasis”UC animal model and culture HT-29 Inflammatory cell in vitro.The key genes and protein expression of miR155-IL-6-STAT3 / SOCS1 pathway were detected by flow cytometry, immunohistochemistry, Western Blot, RT-PCR and immunoprecipitation explore the molecular mechanism of miR155 regulating the interaction of UC signaling and mediating UC,to provide an objective basis for revealing the target of the treatment of UC by Kui Jie Ning Plaster point application.

溃疡性结肠炎(UC)是肠道黏膜反复炎症与免疫失衡的共同结果。研究表明，IL-6-STAT3/SOCS1信号交互调控UC的炎症与免疫耐受，而miR155是该信号通路上游调控的关键因子。前期临床运用溃结宁膏穴位敷贴治疗“虚、瘀”UC取得显著疗效，其机制是减少促炎因子的释放和抑制免疫的过度激活。因此，我们推测溃结宁膏穴位敷贴可能在炎症信号通路的上游就发挥调控作用，即通过miR155-IL-6-STAT3/SOCS1信号交互调控UC炎症与免疫耐受。本课题拟建立“虚、瘀”状态UC动物模型及体外HT-29炎症细胞培养，采用流式细胞、免疫组化、Western Blot、RT-PCR、免疫共沉淀等技术检测miR155-IL-6- STAT3/SOCS1通路的关键基因与蛋白表达，探讨miR155调控该信号通路的交互作用而介导UC炎症与免疫平衡的分子机制，为揭示溃结宁膏穴位敷贴治疗UC的作用靶点提供客观依据。

溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis，UC）是一种自身免疫性疾病，严重危害着人类健康，前期运用溃结宁膏穴位敷贴治疗“虚、瘀”UC取得显著疗效，其机制是减少促炎因子的释放和抑制免疫的过度激活，但作用机制尚不清楚，因此，本项目在前期研究的基础上，以“虚、瘀”状态下UC大鼠及HT-29细胞为研究对象，采用流式细胞、免疫组化、Western-Blot、RT-PCR、Elisa等技术检测miR155-IL-6-STAT3/SOCS1通路的关键基因与蛋白，探讨miR155调控该信号通路的交互作用而介导UC炎症与免疫平衡的分子机制，同时予温肾暖脾、活血化瘀的溃结宁膏进行干预，为揭示溃结宁膏穴位敷贴治疗UC的作用靶点提供客观依据。. 研究的重要结果：（1）通过体内和体外实验，初步阐明了miR155调控IL-6-STAT3/SOCS1信号通路的交互作用而调控UC炎症与免疫耐受的分子机制。（2）采用温肾暖脾，活血化瘀作用的溃结宁膏穴位敷贴对“虚、瘀”状态下的UC进行干预治疗，发现溃结宁膏穴位敷能够改善“虚、瘀”状态下溃疡性结肠炎大鼠的基本症状、体征，降低DAI与CMDI评分；调节miR155-IL-6-STAT3/SOCS1交互信号通路相关基因及蛋白的表达，初步阐明溃结宁膏穴位敷贴通过miR155调控IL-6-STAT3/SOCS1信号通路的交互作用而调控UC炎症与免疫耐受的作用机制。. 本项目选择临床用于治疗溃疡性结肠炎多年、安全性高、疗效好的溃结宁膏穴位敷贴，深入研究溃结宁膏穴位敷贴治疗“虚、瘀”溃疡性结肠炎的分子生物学机制，为中医外治法在UC中的进一步应用提供了分子生物依据，研究成果具有学术价值及实用性。