基于胆碱能抗炎通路的三黄泻心汤"泻火解毒"抑制内毒素血症机制研究

三黄泻心汤是临床泻火解毒治疗三焦实热和内毒素血症之中医经典名方。课题组在前期两个国家自然科学基金研究中发现该方具有明显的抗内毒素和抗炎作用，现代研究证实迷走神经及α7烟碱型乙酰胆碱受体组成的胆碱能系统是机体自身抗炎作用的重要通路。本项目在中医药理论指导下，遵循中医病证结合、方证关联、药证对应、理法方药统一的整体研究思路，提出了"三黄泻心汤抗内毒素血症的作用机制与胆碱能抗炎通路具有相关性"的假说。拟采用巨噬细胞和内毒素血症大鼠模型，从整体、细胞、分子和基因水平，以泻火解毒-胆碱能抗炎通路-内毒素血症的相关性分析为切入点，考察泻心汤对LPS刺激巨噬细胞的乙酰胆碱、乙酰胆碱转移酶、乙酰胆碱酯酶、α7烟碱型乙酰胆碱受体的影响，以及对内毒素血症模型大鼠体内相关递质、受体和基因表达的影响，从胆碱能抗炎通路揭示泻心汤治疗内毒素血症的作用机制，为泻火解毒方防治内毒素血症的临床应用提供科学依据。

本项目遵循中医病证结合、方证关联、药证对应、理法方药统一的整体研究思路，以泻心汤及其组分药物为研究对象，选择LPS刺激巨噬细胞模型和内毒素血症大鼠模型，从整体、细胞、分子和基因表达水平，以泻火解毒-胆碱能抗炎通路-内毒素血症的相关性分析为切入点，采用酶联免疫、免疫印迹和聚合酶链反应等实验技术对“三黄泻心汤抗内毒素血症的作用机制与胆碱能抗炎通路具有相关性”的假说进行了验证性的研究，探讨了泻心汤组分药物大黄、黄芩、黄连对LPS刺激巨噬细胞的炎症因子、受体途径以及内毒素血症大鼠乙酰胆碱含量、乙酰胆碱转移酶、乙酰胆碱酯酶和α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）活性和表达的影响，以及与炎症因子释放的关系。研究发现，三黄泻心汤及其组分药物黄连碱及芦荟大黄素能够抑制LPS引起的巨噬细胞释放炎症因子NO、TNF-α、IL-1β、IL-6，从而抑制炎症反应的进一步加深，且这一作用与其抑制iNOS、IL-1β、IL-6 mRNA表达有关。胆碱能系统受体α7nAChR的阻断并不能抑制黄连碱发挥抗炎作用，表明α7nAChR并不是其直接作用靶点，胆碱能抗炎通路的激活可能是间接作用的结果。大黄、黄芩、黄连对于胆碱能系统相关活性酶ChAT、AChE及ACh在中枢及外周的作用机制有所不同，但总的来说作用相对较弱，其基于胆碱能抗炎通路抑制炎症反应可能是间接一过性地促进机体释放Ach而发挥抗炎作用的，与Ach的生物合成无关；研究中还发现泻心汤组分药物黄连碱及芦荟大黄素对NF-κB、MAPK通路中关键蛋白磷酸化水平均有抑制作用，其作用靶点可能是两条通路上游交叉蛋白TRAF6或更上游的信号蛋白，具体作用靶点的确定有待于进一步深入研究。这也提示泻心汤抗内毒素的作用可能是多条炎症信号通路共同作用的结果。综上所述，项目从胆碱能抗炎通路揭示了泻心汤治疗内毒素血症的作用机制，为三黄泻心汤抗内毒素作用在炎症信号通路上的网络药理研究奠定了基础，为泻火解毒方防治内毒素血症的临床应用提供了科学依据。