凉膈散保护内毒素致急性肺损伤胆碱能抗炎通路机制及配伍研究

We postulate that the definite protective effects of Liangge san on the acute lung injury (ALI) demonstrated in our previous work maybe attributable to its involvement in the cholinergic anti-inflammatory pathway, based on current knowledge about the pathologic process underlying (ALI) and the latest advancement on understanding about the cholinergic anti-inflammatory pathway research. The experimental techniques related to molecular biology and neurology are to employed to investigate the inflammation mechanism underlying ALI, shedding more light on the relationship between the endotoxin-induced ALI and the cholinergic anti-inflammatory pathway. On the basis of the composition characteristics of Liangge san, the present study is designed to observe the impact of Liangge san and its two composition (heat clearing formula and purging formula) on the cholinergic anti-inflammatory pathway involved in ALI. This project will provide experimental evidence on the efficacy of Liangge san, heat clearing and purging way on prevention and treatment of ALI, and broaden the ideology of fundamental research in modern pharmacology of heat-toxic clearing way, organ-clearing and purging way of the traditional Chinese medicine, and also explore a new approach to improving the efficacy of integrative medicine in the treatment of ALI.

本项目依据对急性肺损伤病理过程的现代认识及胆碱能抗炎通路研究新进展，在我们先期关于凉膈散对内毒素诱发急性肺损伤保护作用研究获得肯定结果的基础上，提出影响胆碱能抗炎通路的神经免疫调控作用可能是凉膈散保护内毒素致急性肺损伤的重要机制。拟采用分子生物学（炎症因子的基因与蛋白表达）、神经药理学（胆碱能递质与受体效应）、组织形态学等实验技术，开展凉膈散保护内毒素致急性肺损伤胆碱能机制研究，阐明内毒素致急性肺损伤与胆碱能抗炎通路功能状态的关系，揭示凉膈散对急性肺损伤胆碱能抗炎通路神经免疫调控作用的影响与主要靶点。根据该方的配伍特点，运用药物相互作用评价方法分析凉膈散及其配伍组合（清热方、泻下方）在保护内毒素致急性肺损伤作用上的配伍意义。为凉膈散及清上泻下法防治急性肺损伤提供实验依据，为中医清热解毒、通腑泻下治法治疗炎症性疾病的现代药理基础研究拓宽思路，亦为中西医结合提高急性肺损伤救治效果探索新途径。

急性肺损伤是指以肺实质细胞损伤、肺水肿为主要表现的综合征。目前对于急性肺损伤尚缺乏满意的防治手段，是危重病医学的难点之一。临床研究工作表明，以凉膈散为主方辅助治疗严重感染及炎症致急性肺损伤取得了确切疗效,本课题组关于凉膈散对内毒素诱发急性肺损伤保护作用研究亦获得肯定结果。胆碱能抗炎通路是存在于神经系统与免疫系统之间具有拮抗全身性炎性反应作用的神经免疫调节通路，该抗炎通路的激活，与调节下游级联炎症信号通路密切关联，对预防和拮抗过度的全身性炎症反应有重要作用。本项目依据对急性肺损伤发生发展病理过程的现代认识及胆碱能抗炎通路研究进展，提出并证明影响胆碱能抗炎通路可能是凉膈散保护内毒素致急性肺损伤大鼠的重要机制。我们重点观察了内毒素诱发大鼠急性肺损伤与胆碱能抗炎通路功能状态的关系，以及凉膈散对胆碱能抗炎通路的影响，并进一步探讨了凉膈散对内毒素炎症的抗炎作用机制。研究发现，凉膈散能抑制LPS诱导RAW 264.7 IL-6、TNF-α释放，抑制NF-κB P65入核，抑制核蛋白中NF-κB p65的表达，并能激活胆碱能抗炎通路最重要靶点α7nAchR蛋白的表达。进而发现，凉膈散通过激活α7nAchR抑制NF-κB信号通路、抑制炎症因子的表达。动物实验亦表明凉膈散经胆碱能通路抑制LPS诱导的急性肺损伤，减轻肺表面充血、肿胀及组织病理损伤，抑制肺水肿及炎症，抑制AChE生成，通过激活α7nAchR抑制NF-κB信号通路活化。研究证明，凉膈散是通过激活乙酰胆碱抗炎通路α7nAchR，抑制NF-κB信号通路IκBα的降解和磷酸化，抑制NF-κB p65入核，调控炎症因子表达发挥抗炎作用。此外，我们还筛选了该方中抗内毒素炎症效应成分大黄素、连翘酯苷、甘草酸等，并对其抗内毒素炎症机制作进一步探讨。以上研究工作为为凉膈散及相应治法防治急性肺损伤提供实验依据。