炎性反应多巴胺神经元损伤的细胞分子机制及多靶点治疗的探索

帕金森病(PD)发病机理仍不清晰，但已知很多因素可能与疾病有关。目前研究多集中于相关基因、氧化应激和线粒体损伤等。近年来发现炎症免疫引起的链级反应对PD的发生有重要的意义。本课题分为二部分：1）体外LPS-胶质细胞-神经元的PD细胞模型，试图了解炎性刺激在多巴胺神经元损伤中的作用和机理，包括LPS对小胶质细胞CD14及TLR-4和MD2的影响；Rho激酶和GSK-3beta激活的上游分子；Rho激酶和GSK-3beta的相互关系，以及LPS-小胶质细胞-神经元变性轴中的重要因素。2）体内LPS-PD的动物模型，试图了解LPS介导多巴胺神经元变性的细胞分子机制，包括LPS，小胶质细胞，Rho激酶和GSK-3激活的时间和空间联系；观察炎性细胞侵潤，抗体出现和补体激活及相对选择性DA神经元损伤；同时探索多靶点神经保护复合物在LPS-PD模型中的治疗合理性，为将来临床的实际应用提供理论和实验依据。

帕金森病(PD)发病机理仍不清晰，因此目前治疗手段仍然有限。PD的发病机制有众多学说，但是近年研究显示炎症免疫引起的级链反应对PD的发生和发展具有重要的意义。本课题分为二部分：1）体外 利用LPS-小胶质细胞-神经元的 PD 细胞模型，试图了解炎性刺激在多巴胺神经元损伤中的作用和机理。结果显示炎性介质诱导小胶质细胞TLR-4的表达和NF-kB激活，从而增加炎性细胞因子释放和氧化产物形成。LPS刺激的小胶质细胞条件培养液与PC12神经元共培养可引起神经元死亡。 2）建立LPS经鼻诱导慢性PD动物模型和Rho激酶抑制剂法舒地尔（Fasudil)干预，试图了解炎性介质LPS诱导多巴胺神经元变性丢失的细胞分子机制，同时探索多靶点神经保护复合物Fasudil在LPS-PD模型中干预治疗的合理性和有效性。结果显示我们首次建立的LPS经鼻诱导的PD模型具备经典毒素诱导的PD模型的全部生物学特征，包括行为学的运动进行性减少，病理学的Th神经元丢失和蛋白表达减少，-synuclein表达增加，以及多巴胺产物减少。同时，LPS-PD模型脑内呈现炎性M1型小胶质细胞活化，炎性信号分子和细胞因子产生增加，Rho激酶和GSK-3激活。Fasudil干预可以有效改善行为学和病理学变化，其机制可能与驱动炎性M1型小胶质细胞向抗炎和保护性M2型细胞转化，以及抑制小胶质细胞炎症反应和抑制Rho激酶和GSK-3活性有关。这些结果为将来新药研发和临床的实际应用提供理论和实验依据。