nAChR胞内环蛋白保护重症肌无力模型小鼠的机制研究

重症肌无力（MG）是一种抗体介导的自身免疫病，该病的致病因子是B细胞分泌的烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)胞外域抗体，其水平同疾病的发展密切相关，但其消长受哪些体液因素影响尚不明确。以 nAChR胞内环蛋白免疫可降低MG模型(EAMG) 小鼠体内的nAChR胞外域抗体滴度，阻止其发病，并且,该保护作用可由血清中的抗体成分转移给其他EAMG小鼠。据此，我们认为，nAChR胞内环抗体是EAMG的保护因子，并猜测nAChR胞内环抗体可能通过抗原抗体复合物选择性作用于分泌nAChR胞外域抗体的B细胞，对其产生抑制作用，从而降低nAChR胞外域抗体滴度，阻止EAMG小鼠发病。本研究拟采用分子生物学和细胞生物学手段，从动物实验和体外实验两个层面对该猜想加以证明，具有重要的理论意义和应用前景。

本研究拟从动物实验和临床研究两方面证明nAChR胞内环抗体对EAMG或MG有保护作用，为此我们建立了纯化眼镜蛇α-神经毒素的方法，并以之建立了纯化大鼠肌肉nAChR的方法，但最终未能纯化出足够量的肌肉nAChR建立EAMG模型,最终未能在EAMG模型上验证我们的假说。另一方面，利用基因重组表达技术，我们表达并纯化了nAChR胞内环蛋白及其串联蛋白，以此为抗原获得了胞内环抗血清，证明了胞内环抗体可以沉淀Triton X-100溶液溶解的天然nAChR，此结果提示，文献中报道的nAChR胞内环保护EAMG的现象也许可以通过胞内环抗体的负反馈调节机制解释。进而我们以放射性同位素125I标记的nAChR胞内环蛋白建立了检测血清胞内环抗体的方法，以此检测了77例MG患者及40例正常人的血清抗-nAChR胞内环抗体水平，均检测到nM级别的抗体，个别MG患者的血清抗-nAChR抗体水平明显增高，但MG组与正常对照组的nAChR胞内环抗体均值并无显著差异。综上，以上结果说明，nAChR胞内环抗体的免疫调节作用也许是nAChR胞内环蛋白保护EAMG的机制之一，但因为研究手段所限，我们还没有找到MG血清中有，而正常人血清中没有nAChR胞内环抗体的证据。目前得到的MG血清nAChR CL抗体的结果还不能用于分析其与MG 血清nAChR抗体之间的关系。