对虾细小病毒核酸与核衣壳蛋白识别过程及其选择性装配机制

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）和对虾肝胰腺细小病毒（HPV）都是由单一核衣壳蛋白包装单链核酸基因组为结构的细小病毒，单链核酸具有功能性天然构象与衣壳蛋白存在特异性识别能力，产生选择性装配机制。根据这一特性本研究拟针对上述两种对虾细小病毒，通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)分析并寻找病毒基因组与衣壳蛋白相互作用的核酸包装识别序列，筛选高亲和力核酸包装识别分子，分析空间构象，阐明病毒核酸与衣壳蛋白选择性识别装配机制；通过比较两种病毒装配异同，揭示其识别机制的相关性；同时针对两种病毒不同地理株，分别评价高亲和力核酸包装识别分子与衣壳蛋白的结合特性，从而对分子流行病学和致病机理等方面的研究提供依据。为深入探讨和研发病毒型药物导入技术进行病毒病防治奠定基础。

对虾肝胰腺细小病毒(HPV)核酸与核衣壳蛋白亲和筛选。构建了HPV全基因随机ssDNA库，使用亲和层析纯化并复性重组表达了HPV核衣壳蛋白。在此基础上，使用指数富集的配基系统进化技术（SELEX）经过两次共18轮筛选过程获得258bp与HPV核衣壳蛋白高亲和力核酸包装识别分子。该片段转录并翻译核衣壳蛋白的编码序列。以40bp/段分成12段后检测亲和力，结果显示12段序列与核衣壳蛋白CP的亲和力均小于258bp片段与CP的亲和力。此外，将第二次筛选的1-14轮产物进行亲和力检测发现亲和力逐渐上升，并在第七轮接近饱和。该结果为HPV分子流行病学和致病机理等方面的研究提供了科学依据。. HPV中国株real-time PCR检测方法建立和应用。根据HPV中国株基因组序列，设计引物及TaqMan探针，建立了real-time PCR检测方法。检测灵敏度为4个病毒拷贝，该方法特异性和重复性良好，适用于HPV中国株的检测。所检样品中，中国对虾(Fenneropenaeus chinensis) HPV阳性率高达76%，凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）HPV阳性率很低；养殖水体中的其他环境生物甚至养殖海水中也检出HPV。该技术方法为苗种疫病监测和SPF对虾选育提供了手段，对对虾疾病的预警与防控具有重要意义。. 采用OIE标准检测养殖对虾中传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的PCR检出类型。采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的4对引物对本实验室2011-2012年采集的对虾样品进行IHHNV检测，并对国内存在的IHHNV检出类型进行初步分析。结果显示，在凡纳滨对虾、斑节对虾(Penaeus monodon)、中国对虾、宽沟对虾(M. latisulcatus)中均检测出IHHNV。其中凡纳滨对虾阳性率最高，中国对虾阳性检测率最低。对虾样品2011年阳性率高于2012年，华东地区高于华北、华南两地。研究首次得到国内IHHNV的4种PCR检出类型，填补了我国该疫病背景零积累的空白，对IHHNV流行病学研究和风险评估具有重要价值。. IHHNV致病力分析。通过感染型IHHNV投喂攻毒实验和实时荧光定量PCR检测分析初步探究了IHHNV在对虾体内的增殖情况，从而为该病毒的致病力水平及危害评估提供参考依据。